199860. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gangliozid-származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199860 B 2 8. példa A Gmi gangliozid tercier-butil-észtere Ezt a gangliozid-származékot hasonló módon állítjuk elő és különítjük el, mint a metilésztert az 1. példában, azonban metilalkohol és nátriummetilát helyett tercier-butilalkoholt és nátrium-tercier-butilátot alkalmazunk. A belső észter és az alkoholét között ugyanolyan mólarányt állítunk be, mint az 1. példában. A Dowex gyantát tercier-butilalkohollal mossuk, a szűrlet bepárlása utáni maradékot pedig diklórmetán és tercier- butanol 1:1 arányú elegyének 50 ml menynyiségében oldjuk. 4,9 g nyers terméket kapunk. A GMik gangliozid tisztított tercier-butil-észteréből a termelés 4,1 g. A termék kromatográfiás analízise, amit ugyanolyan módon végzünk, mint az 1. példában, egységes vegyüld jelenlétét mutatja, amely vegyület Rf-értéke 0,71, is jelzi, hogy a Gmi gangliozid és a belső észtere nincs jelen. A nátriumkarbonáttal az 1. példa szerint végzett hidrolízis a Gmi gangliozidot szolgáltatja. A káliumbromid pasztillák infravörös spektroszkópiája a jellemző észtersávot mutatja 1750 cm'1- nél. 9. példa Gangliozidkeverék tercier-butil-észtereinek keveréke Ezt a keveréket hasonló módon állítjuk elő és különítjük el, mint a metilészterek keverékét a 3. példában, azonban metilakohol és nátriummetilát helyett tercier-butilalkoholt és nátrium-tercier- butilátot alkalmazunk. 5 g belső észterkeverékhez 628,6 mg (6,52 mM) nátrium-tercier-butilátot használunk fel. A Dowex gyantát tercier-butilalkohollal mossuk, a szűrlet bepárlása utáni maradékot pedig kloroform és tercier-butanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében oldjuk. 4,9 g nyers terméket kapunk, amelyet szintén a 3. példában leírtak szerint tisztítottunk, azonban a kromatografálásnál eluálószerként kloroform és tercier- butilalkohol 1:1 arányú elegyét alkalmaztuk. 4,1 g tisztított tercier-butil-észter-keveréket kapunk. A káliumbromid pasztillákkal végzett infravörös spektroszkópia a jellemező észtersávot mutatja 1750 cm"1 értéknél. Az 5. példa szerinti módszerrel kromatografálva, a termék Rf- értéke 0,25-0,70. A reakció teljes mértékű lejátszódását a 3. példa szerint igazolhatjuk. 10. példa A Gmi gangliozid benzilésztere 5 g (3,14 mM) Gmi gangliozid-káliumsót 50 ml dimetil- szulfoxidban oldunk, majd az oldathoz hozzáadunk 1,58 g (12,5 mM) benzilkloridot és 2,08 g (12,5 mM) káliumjodidot. A reagáltatást 24 órán át végezzük 25 °C-on, nitrogénben. Ezután az oldatot megoszlásnak vetjük alá n-butanol és víz 2:1 arányú elegyében, hogy eltávolítsuk a dimetilszulfoxidot és a sókat. A butanolos oldatot bepároljuk, a maradékot kloroform és benzilalkohol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében felvesszük, és a reakcióterméket 250 ml acetonnal kicsapjuk. Az 5,3 g nyers terméket preparatív kromatográfiával tisztítjuk szilikagél lemezeken, oldószerkén kloroform, metanol és víz 65:32:7 arányú elegyét használva. A tiszta frakciókat elegyítjük, bepároljuk, a maradékot kloroform és izopropanol 1:1 arányú elegyének 15 ml mennyiségében oldjuk, majd a terméket 75 ml acetonnal kicsapjuk. 4,8 g tiszta Gmi gangliozid-benzilésztert kapunk. A káliumbromid pasztillákkal végzett infravörös spektroszkópia a jellemző észtersávot mutatja 1750 cm"1 értéknél. Az abszolút etilalkoholos oldattal végzett ultraibolya spektroszkópia három maximumot mutat 250, 255 illetve 261 nm-nél. A kromatografálás szilikagél lemezen végezve, oldószerként kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 60:35:8 arányú elegyét, továbbá kloroform, metanol és 2,5 N ammóniumhidroxid 55:45:12 arányú elegyét használva, a kimutatáshoz pedig Ehrich- reagenst alkalmazva, a termék egységesnek bizonyul, Rf- értéke 0,65 illetve 0,53, és mentes a Gmi kiindulási vegyülettől (Rf-értéke 0,40 illetve 0,45). Ha a terméket 0,1 N nátriumkarbonát-oldattal 60 °C-on 1 órán át kezeljük, az észterkötés elhasad, és a kiindulási anyagokat (Gmi gangliozid és benzilalkohol) kapjuk. 11. példa Ganglozidkeverék benzilésztereinek keveréke Szarvasmarha agyszövetből a 2. példa szerint extrakcióval kinyert gangliozidkeverék nátriumsóját ioncserével káliumsóra cseréljük ki, majd 5 g gangliozidkeverék-káliumsót 100 ml dimetilszulfoxidban oldunk, és az oldathoz hozzáadunk 3,3 g (26,0 mM) benzilkloridot és 216 g (13,0 mM) káliumjodidot. A reakcióelegyet 48 órán át reagáltatjuk 25 "C-on nitrogénben. A reakció végén az oldatot megoszlásnak vetjük alá n-butanol és víz 2:1 arányú elegye között a dimetilszulfoxid és a sók eltávolítására. A butanolos oldatot bepároljuk, a maradékot kloroform és benzilalkohol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében oldjuk, és a terméket 250 ml acetonnal kicsapjuk. Az 5,6 g nyers terméket acetát alakban lévő Sephadec -DEAE gyanta alkalmazásával tisztítjuk, oldószerként kloroform, metanol és víz 30:60:8 arányú elegyét használva. A kioldott semleges kémhatású frakciókat elegyítjük, az oldószert lepároljuk, a maradékot kloroform és izopropanol 1:1 arányú elegyének 15 ml menynyiségében felvesszük, és a tisztított benzilésztereket 75 ml acetonnal kicsapjuk. Ilyen módon 4,9 g terméket kapunk. A káliumbromid pasztillákkal végzett infravörös spektroszkópia a jellemező észtersávot mutatja 1750 cm. 1-nél. A termék abszolút etanolos oldatával végzett ultraibolya spektroszkópia három maximumot mutat 250, 255 illetve 261 nm-nél A kromatografálást szilikagél lemezen végezve, oldószerként kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 60:25:8 arányú elegyét, továbbá kloroform, metanol és 2,5 N ammóniumhidroxid 55:45:10 arányú elegyét használva, és a kimutatáshoz Ehrlich- reagenst alkalmazva, a termék Rf-értéke 0,40-0,70 illetve 0,29- 0,53 (az eredeti gangliozidkeverék Rf-értéke 0,05-0,40 illetve 0,12-0,46.) A reakció tökéletes lejátszódását a 3. példában leírt módon igazolhatjuk. 12. példa A Gmi gangliozid allilésztere 5 g (3,14 mM) Gmi gangliozid-káliumsót 50 ml dimetilszulfoxidban oldunk, az oldathoz hozzáadunk 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
