199860. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gangliozid-származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199860 B 2 453,7 mg (3,75 mM) allilbromidot és 625 mg (3,75 mM) káliumjodidot, és a reagáltatást 48 órán át végezzük 25 ’C-on. A reakció lejátszódása után az oldatot megoszlásnak vetjük alá n- butanol és víz 2:1 arányú elegye között a dimetilszulfoxid és a sók eltávolítására. A butanolos oldatot bepároljuk, a maradékot felvesszük kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében, a terméket pedig 250 ml acetonnal kicsapjuk. A kapott 5,1 g nyers terméket preparatív kromatográfiával tisztítjuk szilikagél oszlopon, oldószerként kloroform, metanol és víz 60:35:8 arányú elegyét használva. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat elegyítjük, bepároljuk, a maradékot kloroform és izopropanol 1:1 arányú elegyének 15 ml mennyiségében oldjuk, és a terméket 75 ml acetonnal kicsapjuk. 4,5 g tiszta allilésztert kapunk. A káliumbromid pasztillával végzett infravörös spektroszkópia a jellemező észtersávot mutatja 1750 cm'1 értéknél. A kromatografálást szilikagél lemezeken végezve, oldószerként kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 60:40:9 arányú elegyét, továbbá kloroform, metanol és 2,5 N ammóniumhidroxid 55:45:10 arányú elegyét használva, a kimutatást pedig Ehrlich- reagenssel végezve, a termék egységes vegyületnek bizonyul, amelynek Rf-értéke 0,56 illetve 0,39, és nem tartalmazza a kiindulási Gmi gangliozidot, amelynek Rf-értéke 0,40 illetve 0,42. Ha a terméket 0,1 N nátriumkarbonát-oldattal kezeljük 60 ’C-on 1 órán át, az észterkötés elhasad, és a kiindulási Gmi gangliozid és az allilalkohol képződik. 13. példa A Gmi gangliozid etoxi-karbonil-metil-észtere 5 g (3,14 mM) Gmi gangliozid-káliumsót 50 ml dimetil- szulfoxidban oldunk, majd az oldathoz hozzáadunk 2,12 g (12,5 mM) monobróm-ecetsav-etilészert és 2,08 g (12,5 mM) káliumjodidot A reagáltatást 25 °C hőmérsékleten folytatjuk le 24 órán át, nitrogén alatt. Az oldatot ezután megoszlásnak vetjük alá 2 rész n-butanollal és 1 rész vízzel a dimetilszulfoxid és a sók eltávolítására. A butanolos oldatot bepároljuk, a maradékot felvesszük kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében, és a terméket 250 ml acetonnal kicsapjuk. A kapott 4,8 g nyers terméket preparatív kromotagráfiával tisztítjuk szilikagél oszlopon, oldószerként kloroform, metanol és víz 60:32:7 arányú elegyét használva. A tiszta frakciókat elegyítjük bepároljuk, a maradékot kloroform és metonol 1:1 arányú elegyének 15 ml mennyiségében oldjuk, és a terméket 75 ml acetonnal kicsapjuk. Ilyen módon 2,4 g tisztított etoxi-karbonil- metil-észtert kapunk. A káliumbromid pasztillákkal végzett infravörös spektroszkópia a jellemező észtersávot mutatja 1750 cm^-nél. A kromatografálást szilikagél lemezen végezve, oldószerként kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 0,3 %-os elegyét használva, és a kimutatáshoz Ehrlich-reagenst alkalmazva, a termék egységes vegyületnek bizonyul, amelynek Rf-értéke 0,64 és mentes a kiindulási Gmi gangliozidtól, amelynek Rf-értéke 0,40. Ha a terméket 0,1 N nátriumkarbonát-oldattal kezeljük 60 'C-on 1 órán át, az észterkötés felhasad, és az eredeti Gmi gangliozid képződik. 14. példa A Gmi gangliozid amidja 5 g (3,27 mM) gangliozid belső észtert 100 ml vízmentes izopropilalkolplban szuszpendálunk, a szuszpenziót -5 'C-on keverjük, és vízmentes ammóniát buborékoltatunk át rajta 3 órán át, vízmentes körülmények között. A reakció végén az oldószert lepároljuk, a maradékot felvesszük kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében, és a terméket 250 ml acetonnal kicsapjuk. A kapott 4,9 g nyers terméket 100 ml 1 %-os nátriumkarbonát- oldattal kezeljük 25 °C-on 30 percig az észtercsoportok közül megmaradtak hidrolízise céljából, vízben dializáljuk, vákuumban bepároljuk, és a maradékot preparatív kromatográfiával tisztítjuk szilikagél oszlopon, első oldószerként kloroform, metanol és víz 60:40:9 arányú elegyét, második oldószerként kloroform, metanol és víz 55:45:10 arányú elegyét használva. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároljuk, és a maradékot kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 15 ml menynyiségében oldjuk. Az amidot 75 ml aceton hozzáadásával csapjuk ki. 4,8 g amidot kapunk. Szilikagél lemezeken kromatografálva, oldószerként kloroform, metanol és 4N ammóniumhidroxid 55:45:10 arányú elegyét illetve kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 55:45:10 arányú elegyét használva, a kimutatáshoz pedig rezorcin reagenst alkalmazva, a termék egységes vegyületnek bizonyul (Rf- értéke 0,10 illetve 0,32), amely mentes a Gmi gangliozidtól (Rf-értéke 0,35 illetve 0,65). 15. példa Gangliozidkeverék amidjainak keveréke 5 g gangliozid-belső észterkeveréket, amelyet a 2. példában írtuk le, ammóniával reagáltatunk a 14. példában ismertetett módon. A terméket acetonnal csapjuk ki szintén a 14 példa szerint. Miután hidrolízist végzünk nátriumkarbonáttal szintén a 14. példa szerint, a nyers terméket a következőképpen tisztítjuk. A hidrolízis utáni terméket vízzel dializáljuk, az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot kloroform, metanol és víz 30:60:8 arányú elegyének 50 ml mennyiségében felvesszük, és preparatív kromatográfiával tisztítjuk Sephadex DEAE A-25 gyantán (amely acetát alakban van jelen), oldószerként kloroform, metanol és víz 30:60:8 arányú elegyét használva. Az elúcióval kapott semleges kémhatású frakciókat szárazra pároljuk, dializáljuk, ismét szárazra pároljuk, kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 15 ml mennyiségében oldjuk, és az amidkeveréket 75 ml acetonnal kicsapjuk. 4,8 g terméket kapunk. Az infravörös spektroszkópia nem mutatja a jellemző észtersávot 1750 cm'1 értéknél. A kromatografálást szilikagél lemezeken végezve, oldószerként kloroform, metanol és 4N ammóniumhidroxid 55:45:10 arányú elegyét illetve kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 55:45:10 arányú elegyét használva, és a kimutatáshoz rezorcin reagenst 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
