199860. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gangliozid-származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199860 B 2 alkalmazva, a termék Rf-értéke 0,01-0,10 illetve 0,55- 0,45 (az eredeti gangliozid Rf-értéke 0,15-0,70 illetve 0,20-0,70). 16. példa A Gmi gangliozid metilamidja 5 g (3,27 mM) Gmi gangliozid belső észtert 25 ml vízmentes metilamidban szuszpendálunk visszafolyató hűtővel szerelt lombikban, -25 °C-on, vízmentes körülmények között. A szuszpenziót 3 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd az oldószert lepároljuk, a maradékot kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében felvesszük, és a terméket 250 ml aceton hozzáadásával kicsapjuk. A kapott 4,9 g nyers terméket 100 ml 1 %-os nátriumkarbonát- oldattal kezeljük 30 percig 25 'C-on a megmaradt észtercsoportok hidrolízise céljából, majd vízben dializáljuk. Az oldatot vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot pedig preparatív kromatográfiával tisztítjuk acetát alakban lévő Sephadex DEAE A- 25 gyantán, oldószerként kloroform, metanol és víz 30:60:8 arányú elegyét használva. A semleges kémhatású frakciókat elegyítjük, szárazra pároljuk, dializáljuk, ismét bepároljuk, és kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 15 ml mennyiségében oldjuk. A metilamidot 75 ml aceton hozzáadásával csapjuk ki. 4,8 g terméket kapunk. Az infravörös spektroszkópia nem mutatja a jellemző észtersávot 1750 cm'1 értéknél. A kromatografálást szilikagél lemezeken végezve, oldószerkén kloroform, metanol és 4 N ammóniumhidroxid 55:45:10 arányú elegyét illetve kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 55:45:10 arányú elegyét használva, a kimutatáshoz pedig rezorcin reagenst használva, a termék egységes vegyületnek bizonyul, amelynek Rf-értéke 0,13 és 0,72, s nem tartalmaz Gmi gangliozidot (Rf-értéke 0,35 illetve 0,65). 17. példa Gangliozidkeverék metilamidjainak keveréke 5 g mennyiségű, a 15. példában kiindulási anyagként alkalmazott belső észterkeveréket metilaminnal kezelünk a 16. példában leírtak szerint, majd a reakcióterméket az ott megadott módon kezeljük és különítjük el. 4,8 g tiszta terméket kapunk, amely a felhasznált gangliozidkeverék metilamidjainak keveréke. A terméknek a 16. példa szerint meghatározott Rf-értéke 0,01-0,10 illetve 0,20-0,45 (az eredeti gangliozidkeverék Rf-értéke 0,15-0,70 illetve 0,20-0,70). Az infravörös spektoszkópiás adatok ugyanolyanok, mint a 16. példában. 18. példa A Gmi gangliozid etilamidja Ezt a gangliozid-származékot a 16. példában megadott módon állítjuk elő 5 g (3,27 mM) Gmi gangliozid belső észterből és 25 ml etilaminból. A tisztítást is a 16. példában leírtak szerint végezzük. 4,8 g tiszta Gmi gangliozid-etilamidot kapunk. Az infravörös spektroszkópiás adatok ugyanolyanok, mint a 16. példában a metilamidnál, és az ott leírtak szerint végzett kromatográfiás vizsgálat igazolta, hogy a termék egységes és Gmi gangliozidot nem tartalmaz (az Rf-értéke 0,19 illetve 0,75, míg a Gmi gangliozid Rf-értéke 0,35 illetve 0,65). 19. példa Gangliozidkeverék etilamidjainak keveréke A származékoknak ezt a keverékét a 17. példa szerint felhasznált gangliozid belső észterkeverék 5 g menynyiségéből kiindulva, 25 ml etilamin felhasználásával állítjuk elő a 17. példában leírt módon, ugyanolyan tisztító eljárást is használva. A gangliozidkeverék etilamidjainak a keverékéből a termelés 4,8 g. A kromatográfiás vizsgálatot szilikagél lemezeken végezve, oldószerként kloroform, metanol és 4 N ammóniumhidroxid 55:45:10 arányú elegyét illetve kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 60:35:8 arányú elegyét használva, a kimutatáshoz pedig rezocin reagenst alkalmazva, a termék Rf-értéke 0,11— 0,24 illetve 0,35-0,55 (az eredeti gangliozidkeverék Rf-értéke 0,15-0,70 illetve 0,05-040). 20. példa A Gmi gangliozid butil-2-amidja 5 g (3,27 mM) Gmi gangliozid belső észtert 25 ml vízmentes piridinben oldunk. 12,5 ml 2-butilamint adunk az oldathoz, és a reakcióelegyet vízmentes körülmények között 24 órán át keverjük 25 'C-oa A reagáltatás végén az oldószert lepároljuk, a maradékot kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében felvesszük, és a reakcióterméket 250 ml acetonnal kicsapjuk. A kapott 5,2 g nyers terméket 100 ml 1 %-os nátriumkarbonáttal kezeljük 30 percig 25 ”C-on a még meglévő észtercsoportok hidrolízise céljából, majd vízzel szemben dializáljuk, a dializált oldatot szárazra pároljuk vákuumban, a maradékot pedig preparatív kromatográfiával tisztítjuk szilikagélen, oldószerként kloroform, metanol és víz 110:40:6 arányú elegyét használva. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat elegyítjük, az oldatot szárazra pároljuk, a maradékot kloroform és izopropanol 1:1 arányú elegyének 15 ml mennyiségében oldjuk, a butilamidot pedig 75 ml acetonnal kicsapjuk. 4,7 g cím szerinti terméket kapunk. Az infravörös spektroszkópia már nem mutatja a jellemző észtersávot 1750 cm'1 értéknél. A kromatográfiát szilikagél lemezeken végezve, oldószerként kloroform, metanol és 4 N ammóniumhidroxid 60:40:9 arányú elegyét illetve kloroform, metanol és 0,3 %-os kalciumklorid 60:35:8 arányú elegyét használva, a kimutatáshoz pedig rezorcin reagenst alkalmazva, a termék egységesnek bizonyult, s Gmi gangliozidot nem tartalmazott. A termék Rf-értéke 0,30 illerve 0,50, míg a Gmi gangliozidé 0,42 illetve 0,40. 21. példa A Gmi gangliozid benzilamidja 5 g (3,27 mM) Gmi gangliozid belső észtert 20 ml vízmentes piridinben oldunk, az oldathoz 396 mg (3,27 mM) benzilamint adunk, és a reakcióelegyet 24 órán át keverjük szobahőmérsékleten, vízmentes körülmények között. A reagáltatás végén az oldószert lepároljuk, a maradékot felvesszük kloroform és metanol 1:1 arányú elegyének 50 ml mennyiségében, majd a terméket 250 ml aceton hozzáadásával kicsapjuk. A kapott 5,1 g nyers terméket a 16. példában leírt módon tisztítjuk. 4,6 g tiszta gangliozid-benzi- 1 am időt kapunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
