199789. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkil-melatoninok előállítására
1 HU 199789 B 2 termelés) nyers hidrazont, R-(-)-3-(p- metoxi-fenilhidrazono)-5-metil-2-piperidont kapunk, o.p.: 201 °C. Kis mintát szilikagélen, etil-acetát eluens alkalmazásával oszlopkromatográfiásan tisztítunk. [a]25=-82° (c=9,5, metanol). Elemanalízis a C13H17N3O2 képlet alapján: számított: C 63,14; H 6,92; N 16,99; mért C 62,97; H 6,80; N 16,88. 2,30 g (9,3 mmól) hidrazon és 17 ml 85%-os hangyasav elegyét 3 óráig 85-90°C-ra melegítjük. Ezután az elegyhez addig csepegtetünk vizet, amíg a csapadék kiválás megindul. A kristályosító elegyet éjjelen át hűtjük, majd a nyersterméket leszűrjük. A szilárd anyagot vízzel mossuk, majd megszárítjuk. 1,41 g (66%) nyers S-(-)-laktámot, azaz S-(-)-l-oxo-4-metil-6- metoxi-1,2,3,4-tetrahidro-9H-pirido(3,4-b)indolt kapunk, o.p.: 215°C. Kis mintát ecaton/víz oldószerelegyből átkristályosítunk. A termék spektroszkópiai jellemzői azonosak a racém vegyületével, amelyet az 1. példában írtunk le. [oc]25=-6° (c=5, metanol). Elemanalízis a C13H14N2O2 képlet alapján: számított: C 67,81; H 6,13; N 12,17; mért: C 67,51; H 5,99; N 11,94. Az S-(-)-laktám S-(-)-béta-metil-melatoninná történő átalakítását az 1. példában leírt eljárás szerint végezzük. A végtermék S-(-)- béta-metil-melatonin spektroszkópiai jellemzői megegyeznek a racemát jellemzőivel. [a]25=-5,6° (c=5, metanol). Az R-(+)-béta-metil-melatonint S-(+)-3-(etoxi-karbonil)-5-metil- 2-piperidonból kiindulva a fenti eljárás szerint állítjuk elő. A termék spektroszkópiai jellemzői megegyeznek az S-(-)-anyag jellemzőivel de ellentétes forgatással rendelkezik. 7 7. példa S-(-)-béta-Metil-6-kIór-melatonin és R-(+)-bétametil-6-klór- melatonin előállítása 4,0 g (21 mmól) 3-klór-4-metoxi-nitrobenzol 200 ml toluolban készült oldatát 0,4 g 5%-os aluminiumoxidra felvitt palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort leszűrjük és az oldószert elpárologtatjuk. Az előállított nyers 3-klór-anizidint éteres oldatba visszük és éteres sósavval reagáltatjuk. így hidrokloridsót képezünk, amelyet leszűrünk és megszántunk. Termelés 2,48 g (61%). 2,40 g (12,4 mmól) 3-klór-anizidin hidroklorid és 7 ml 4 n sósav elegyét 0°C-on 0,86 g (12,5 mmól) nátriumnitrit 5 ml vízben készült oldatával reagáltatjuk. Az elegyet 1 óráig 0°C-on keverjük, majd leszűrjük és a szürletet lassan jegesen hűtött 2,6 g (24 mmól) nátrium-fluoro-borát 8 ml vízben készült oldatához adjuk. Az elegyet 1 óráig 0°C-on keveijük majd a sót leszűrjük. A szilárd anyagot hideg 5%-os nátrium-fluoro-borát oldattal, hideg metanollal és éterrel mossuk. A terméket megszárítjuk és 2,2 g (69% termelés) 3-klór-4-metoxi-benzol-diazónium-fluoroborátot kapunk. 2,03 g (11,0 mmól) R-(-)-3-(etoxi-karbonil)-5-metil-2-piperidon 30 ml 0,75 mólos nátrium-hidroxiddal készült elegyét éjjelen át szobahőmérsékleten (24°C) keverjük. Ezután az oldatot 0°C-ra hűtjük és pH értékét 3 mólos sósavval 3,5 értékre csökkentjük. Az elegyhez 2,8 g (10,9 mmól) fenti diazóniumsót adunk kis részletekben és éjjelen át körülbelül 0°C-on tartjuk. A termék R- (-)-3-(3-klór-4-metoxi-fenil-hidrazono)-5-metil-2-piperidont leszűrjük, vízzel mossuk és megszárítjuk. 2,30 g (75% termelés) anyagot kapunk, o.p.: 205°C. Kis mintát kromatográfiásan rövid szilikagél oszlopon etil-acetát eluens alkalmazásával tovább tisztítunk. [a]2S=-58°C (c=10, metanol). Elemanalízis a C13H16N3O2CI képlet alapján: számított: C 55,42; H 5,72; N 14,91; Cl 12,58; mért: C 55,79; H 5,78; N 14,72; Cl 12,69. 2,20 g (7,8 mmól) R-(-)-hidrazon és 20 ml 90%-os hangyasav elegyét 3 óráig 85°C-ra melegítjük, majd lassan azonos térfogatú vízzel hígítjuk. Az elegyet hagyjuk lehűlni, majd éjjelen át hűtjük. A sötét csapadékot leszűrjük, vízzel mossuk és aceton/víz oldószerelegyből átkristályosítjuk. 1,20 g (60% termelés) S-(-)- l-oxo-4-metil-6-metoxi-7-klór-l,2,3,4- tetrahidro-9H-piridio[3,4- b] indolt kapunk, o.p.: 248°C. [a]25=-12,2°C (c=10, metanol). Elemanalízis a C13H13N2O2CI képlet alapján: számított: C 58,99; H 4,95; N 10,58; Cl 13,39; mért: C 59,16; H 4,88; N 10,80; Cl 13,15. Az S-(-)-laktám átalakítását az S-(-)-6-klór-bétametil- melatoninná a 3. példa eljárása szerint végezzük. A termék S-(-)- béta-metil-6-klór-melatonin spektroszkópiailag azonos a racemát vegyülettel, azonban optikai forgatóképessége: [oc]25=-13,2 (c=10, metanol). Az R-(+)-6-klór-béta-metil-melatonint S-(+)-3-(etoxi-karbonil)-5- metil-piperidonból kiindulva a fent leírt eljárással állítjuk elő. A sztereoizomer azonos az S-(-)-anyaggal csak optikai forgatóképessége ellenkező előjelű. A találmány szerinti eljárással előállított anyagok ovulatio gátló hatással rendelkeznek. Az ovulatio gátlás mértékét az alábbi vizsgálat segítségével határoztuk meg. Felnőtt nőstény patkányokat alkalmaztunk, amelyek szabályos négynapos ivarzási ciklussal rendelkeznek. Az ivarzási ciklus 2 nap kétivarzásbó, egy nap előestrusból és egy nap ivarzásból áll. A napi vaginális kenetet analizáltuk és olyan patkányokat választottunk ki, amelyek legalább két egymást követő ivarzási ciklust mutattak. Az előivarzási napnak délutánján, luteinizáló hormon (LH) jut a hypophysisből a vérbe. Az LH eljut a petefészekbe, ahol ovulátiot indulál és peték megjelenését eredményezi az ivarzás napján a petevezetékben. A nem kontroll patkányoknak a vizsgált vegyületet orálisan adagoltuk délben az előivarzás napján. Mind a kontroll, mind pedig a nem kontroll patkányokat megöltük a következő napon, az ivarzás napján. A petevezetéket minden patkányból eltávolítottuk és mikroszkopikusan vizsgáltuk a pete jelenlétét. Amennyiben a vegyület a kontroll állatokéhoz képest 50% csökkenést okozott a nem-kontroli patkányok ovulatiojában, azt aktívnak tekintettük az ovulatio gátlásában és meghatároztuk azt a minimális hatásos koncentrációt, amely az ovulatio gátlásához szükséges. Az alábbi, I. táblázatban bemutatjuk a fenti eljárásban a ß-metil-melatoninokkal kapott eredményeket. A melatonin eredményeit is feltüntettük összehason-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
