199788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-metil-beta-oxo-alpha-(fenil-karbamoil)-2-pirrol-propionitril trometaminsójának és a vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199788 B 2 Az (I) képletű l-metil-ß-oxo-a-(fenil-karbamoil)- 2-pirrol- propionitrilt a 4 256 759 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti. Ez az (I) képletű vegyület savas jellegű és az (la) képletű enolos tautomer formában is létezhet. A 4 256 759 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban a vegyületcsoport sói közül a gyógyászatilag elfogadható bázisokkal, így az alkálifém-, alkáli-földfém-, réz- és cink-hidroxidokkal; ammóniával, mono-, di- vagy tri(kevés szénatomos)alkil- vagy hidroxi-alkil-aminokkal, alkilén-iminekkel vagy alkilén-diaminokkal képzett, például nátrium-, kálium-, magnézium-, ammonium-, mono-, di- vagy tri(metil-, etil- vagy hidroxi-etil)-ammónium-, pirrolidinium-, etilén-diammónium- vagy morfoliniumsókat vagy ezek különböző hidrátjait említik. Az (I) képletű vegyület sói közül a nátrium-, kálium-, kálcium- és trisz(hidroxi-etil)-ammóniumazaz a trietanol-amin-sót írják le. A nátrium-, kálium- és kalciumsók nem kristályosak. A trometamin a trisz(hidroxi-metil)-amino-metán primer amin, amelyet 2-amino-2-(hidroxi-metil)-l,3- propán-diolnak is neveznek, és a Merck Index (Tizedik kiadás) 1395. oldalán ismertetnek. A trietanol-amint, amely tercier amin, kémiai úton a laboratűriumban N-nitrozo-dietanol-aminná alakították, és erről a vegyületről megállapították, hogy potenciálisan rákkeltő. A trietanol-amin-sókkal, mint gyógyszerekkel kapcsolatban néhányan aggodalmukat juttatták kifejezésre azon feltételezés alapján, hogy a trietanol-amin az emlősökben valahogy N-nitrozodietanol- aminná mettabolizálódhat. Ugyanakkor a trometamin primer aminról nem ismert, hogy kémiailag bármilyen N-nitrozo-származékká lenne alakítható. A találmány az l-metil-ß-oxo-a-(fenil-karbamoil)- 2-pirrol- propionitril új, gyógyászatilag elfogadható trometaminsójára, ezt a sót tartalmazó gyógyászati készítményekre és emlősök gyulladásos és ízületi megbetegedéseinek kezelési eljárására vonatkozik, amely szerint az említett sót az ilyen kezelésre szoruló emlősöknek beadjuk. A találmány tárgya közelebbről az 1-metil-ß-oxoa-(fenil-karbamoil)-2-pirrol-propionitril és trometamin 1:1 sója, amely a (II) szerkezeti képlettel jellemezhető. A (II) képletű új só gyulladásellenes és izületi gyulladás elleni hatást fejt ki. A (II) képletű só az izületi gyulladás esetében olyan biológiai hatást is mutat, amely a betegséget potenciálisan módosíthatja, ilyen többek között a porc mátrix lebomlásának gátlása és a csökkent celluláris immunitás fokozása. A só jól tolerálható és a gyógyászatilag hatásos dózisokban lényegében mentes a nemkívánt mellékhatásoktól. A patkányokkal végzett akut toxicitás vizsgálatok során azt figyeltük meg, hogy a találmány szerinti só az (I) képletű savnál vagy trietanol-amin-sójánál kevésbé toxikus. 2,4 millimol/kg p.o. (932 mg/kg p.o.) dózisnál a (II) képletű trometaminsó esetében nem pusztult el állat (0/10), míg az (I) képletű vegyület trietanol-amin sójának ekvimoláris dózisa 2,4 millimol/kg p.o. (1000 mg/kg p.o.) vizsgálatakor 50%-os, az (I) képletű szabad sav ekvimoláris dózisa (2,4 millimol, 641 mg/kg p.o.) vizsgálatakor pedig 40%-os volt a pusztulási arány. Emellett a találmány szerinti trometaminsó esetében nem kell tartani egy N-nitrozo-származékká történő bármilyen metabolikus átalakulástól. Az előzőekben elmondottak miatt a találmány szerinti vegyület különösen hasznos, ha emlősnek, többek között embernek, egyedül vagy kombinációban arthritis deformans (izületi csúz) és csont- izületi gyulladás kezelésére adagoljuk. A farmakológiai tulajdonságokat, elsősorban a gyulladásgátló, fájdalomcsillapító, reumaellenes, immunpotencirozó és izületi gyulladás elleni hatást in vitro vagy in vivo vizsgálatokkal szemléltethetjük, amelyekhez előnyösen emlősöket, így patkányokat, egereket, tengeri malacokat vagy kutyákat használhatunk. A vegyületet az állatoknak enterálisan, előnyösen orálisan, parenterálisan, például szubkután vagy intravénásán, vagy helyileg, például vizes oldat vagy szuszpenzió formájában adagolhatjuk. Az alkalmazott dózis körülbelül 0,1 és 100 mg/kg/nap, előnyösen körülbelül 1 és 50 mg/kg/nap között változhat. A vizsgálatok magukba foglalják az említett hatások becslésére szolgáló klasszikus vizsgálati módszereket, így a karragenin talp-ödéma és az adjuváns artritisz vizsgálatokat patkányok esetében, valamint a kutyákkal végzett izhártyagyulladás tesztet. Az in vitro vizsgálatokban a vegyület koncentrációja körülbelül 1x10"8M és lxlO"4M, előnyösen körülbelül lxlO"7M és lxl0'5M között változik. Az ilyen vizsgálatok közé tartoznak az in vitro semleges proteáz gátlás, amelyet az Arthritis Rheum. 17., 47 (1974.) irodalmi helyen írtak le, vagy a neutrofil kemotaxis gátlás, amelyet az Ann. N.Y. Acad. Sei. folyóiratban [256., 177. (1975.)] ismertetnek, vagy a leukocita tapadás csökkentése, amelyről az Amer. J. Med. folyóiratban [61., 597. (1976.)] számolnak be. A neutrofilek aktivációjának kémiai gátlását in vivo úgy határozthatjuk meg, hogy a patkányba ültetett, karrageninnel impregnált poliuretán szivacsban a neutrofilek akkumulációjának az orálisan adagolt vegyület hatására bekövetkező gátlását méijük. Az immunpotencirozó hatást BCG-immunizált állatokban lehet meghatározni. A celluáris immunitás fokozását in vitro úgy határozzuk meg, hogy BCG- immunizált patkányokból izolált makrofágok kemotaxisának növekedését mérjük. Az in vivo meghatározás BCG-immunizált, adjuvánssal kiváltott izületi gyulladásos patkányokban, lényegében a Current Therapeutic Research-ben [30., S34 (1981.)] leírt módon, a késleltetett túlérzékenységi reakcióra gyakorolt hatás mérésével történik. A porc mátrix lebomlására kifejtett hatás a mátrix lebontásnak a porc-izületi hártya társ-tenyésztési modelljében határozható meg a következő módon: A borjú orrsövény porcának proteoglükán mátrixát a 35S izotópnak a glükozaminoglükánba való bevitelével jelezzük. Porcszeleteket egy éjszakán át szulfátmentes közegben 35S- nátrium-szulfáttal inkubálunk. A 3% izotóppal jelzett porcszeleteket normál izületi hártya explantátumokkal együtt többüreges szövettenyésztő lemezen tenyésztjük. Négy napos inkubálás után a közeg 100 pl-es részletének az aktivitását mérjük. A porcszeleteket hidrolizáljuk, és a porc-hidrolizátum 100 pl-es részletének aktivitását mérjük. Meghatározzuk a közegbe került 35$ százalékos 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
