199783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinblasztin-antitest konjugátumok és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199783 B 2 A jelen találmány tárgya: eljárás vinblasztin (VLB) és antitestek új konjugátumai előállítására. Az immunológusok és vegyészek az utóbbi időkben közös munkákat végeznek, hogy valamely immunglobulinból, amely egy meghatározott antigént céloz meg, és egy gyógyszerből, vagy más, aktív szerből összeállított konjugátumot fejlesszenek ki, amely gyógyszert vagy aktív szert az immunglobulin viszi el a kívánt helyre. Az irodalomban több ilyen konjugátumot írtak le. így például a 2137202 és 2137210 számú brit szabadalmi bejelentések vinka alkaloidok, amelyek rákellenes szerek, konjugátumait írják le immunglobulinokkal, amelyek tumor antigéneket céloznak meg. A tudományos erőfeszítések ellenére, amelyeket az ilyen konjugátumokra szántak, e területeken még korai fejlődési stádiumban vannak. A problémák közül, amelyet még nem értünk jól, nem megoldott az aktív szer nagy mennyiségének terhelése az immunglobulinra úgy, hogy ez ne hasson károsan az antigénhez való kötődési képességére. Ennek a problémának az egyik megoldását nyújtja a jelen találmány, amely lehetővé teszi olyan konjugátumok szintézisét, amelyben a hatóanyag aránya az immunglobulinhoz viszonyítva magas. A jelen találmány olyan (I) általános képletű konjugátumokkal foglalkozik, ahol- R2 jelentése metilcsoport, R5 jelentése hidrogénatom, R4 jelentése etilcsoport, és R3 jelentése hidroxilcsoport;- R jelentése -NH-N= csoport,- R* jelentése hidrogénatom, m egész szám 5-től 35-ig, Ab valamely IgG osztályba tartozó ismert antitest, amely 6-18% közti mennyiségben tartalmaz szénhidrátot. A találmány eljárás az (I) általános képletű konjugátumok előállítására, melynek során egy IgG osztályú, 6 és 18% közti szénhidrát-tartalmú oxidált antitestet a (II) általános képletű vinka hidraziddal reagáltatunk, ahol a képletben- R' jelentése hidrazinocsoport, R8 jelentése hidrogénatom, és a többi szubsztituens a fent megadott. Az (I) általános képletű konjugátumok rákellenes szerekként alkalmazhatók, és injektálható gyógyászati készítményeket állíthatunk elő belőlük, amelyek az (I) általános képletű konjugátumokat tartalmazzák valamely gyógyászatilag elfogadható higítóval társulva. A találmány szerinti eljárásban a (H) általános képletű kiindulási anyag, ahol R2, R3, R4, R5, R7 és R8 a fenti, a 4-dezacetil-VLB-3-karboxi- hidrazid, a 3,097,137 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti. A jelen találmány konjugátumainak képzésére alkalmas (II) általános képletű hidrazidot például a 4,203,898 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás eljárása szerint (12. oszlop, 65. sortól és 3. példa, 18. oszlop) készítjük el. Ebben az eljárásban vízmentes hidrazint reagáltatunk a (III) általános képlet szerinti vinka alkaloiddal etanolban, lezárt csőben mintegy 60 ’C hőmérsékleten. Ennek a reakciónak a terméke 4- dezacetil-3-karboxi-hidrazid, mivel az acetoxicsoport a C-4-nél bázikus reakciókörülmények között hidrolizál. A jelen konjugátumok másik komponense az IgG osztály valamely oxidált antitestje, előnyösen valamely oxidált monoklonális antitest (Mo- Ab), amely antitest 6-18% szénhidrátot tartalmaz. így a jelen találmányban alkalmazott antitest egészen szokatlan, mivel a tipikus IgG immunglobulinok csak 2-5 % szénhidrátot tartalmaznak. [A szakértők különböző számokat becsülnek az IgG szénhidráttartalmára. így pl. Goding 2-3 %-ról számol be a Monoclonal Antibodies: Principles and Practice című könyvében (Academic Press, 1983,9. oldal), míg Ghose és munkatársai 3 %- ról beszélnek a J. Immunol. Methods 59, 130 (1983) irodalmi helyen]. Az „antitest” fogalmát ebben a bejelentésben úgy alkalmazzuk, hogy magában foglalja a fentebb leírt osztály antitestjeinek Fab, Fab’ és F(ab’)2 fragmentumait is. Az antitest lehet olyan antitest, ahol a szénhidrát szokatlan mennyisége a könnyű láncokban helyezkedik el. A nehéz láncok is tartalmazhatnak azonban szokatlan mennyiségű szénhidrátot, vagy teljes egészében az antitest Fab része tartalmazhatja a szénhidrát szokatlan mennyiségét. Másrészt a szénhidrát szokatlan mennyiségét tartalmazhatja, vagy részben tartalmazhatja az antitest Fc része. Miközben a jelen találmányban alkalmazott antitestek 6-18 % szénhidrátot tartalmaznak, az antitestek előnyös osztályai különböző más tartományokon belül tartalmaznak szénhidrátot, az alábbiak szerint: 1. ) 6-15 % 2. ) 6-12 % 3. ) 8-15 % 4. ) 8-12 % 5. ) 6-10 % 6. ) 10-15 % Az antitestek előállításának technikái immunizált állatok szérumából, vagy monoklonális termékeket kiválasztó hibridómák tenyészetéből jól ismertek. A hibridómákat lehet genetikai manipulációs technikákkal módosítani is úgy, hogy meghatározott tulajdonságokkal bíró antitesteket termeljenek, mint pl. az itt alkalmazott antitesteket szokatlan szénhidráttartalommal. A tisztított antitesteket lehet kémiai úton is módosítani, hogy növeljük szénhidráttartalmukat. A jelen tartományban alkalmazott reprezentatív antitestek közt találunk pl. mono- és poliklonális antitesteket (i) emberi vagy állati tumorral társult antigének ellen; (ii) emberi B- és T-sejt antigének ellen; (iii) emberi la antigének ellen; (iv) vírus, gomba és baktérium antigének ellen; és (v) emberi gyulladásos vagy allergiás reakcióban érintett sejtek ellen. Az emberi és állati tumorral társult antigének elleni előnyös antitestek közül megemlíthetjük: (i) karcino-embrionális antigénnel immunizált kecskékből vagy birkákból származó IgG; (ii) IgG nyúl akut limfoblasztos leukémia elleni szérumából; (iii) IgG különböző főemlősök akut limfoblasztos leukémia, akut mieloblasztos leukémia, krónikus limfoblasztos leukémia és krónikus granulocitás leukémia ellen keletkezett antiszérumából; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
