199766. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 5-lipoxigenáz gátló hatású biciklusos vegyületek, valamint az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199766 B 2 tálában előnyös oldószer, mint például víz, valamely alkohol, mint például metanol, etanol, propanol, dioxán, acetonitril, tetrahidrofurán, dimetilformamid, piridin, és hasonló oldószerek alkalmazása. A reakció hőmérséklete nem meghatározott és a reakciót általában hűtés mellett, szobahőmérsékleten vagy magasabb hőmérsékleten hajtjuk végre. 3. eljárás Az eljárás alkalmas (le) általános képletű vegyületek előállítására az (Id) általános képletű vegyületek hidrolízisével. A hidrolízist bármely szokásos, a cianocsoport savamid csoporttá történő hidrolízisében alkalmazott eljárással megvalósíthatjuk. A hidrolízist előnyösen bázis vagy sav jelenlétében hajtjuk végre. Alkalmas bázisok lehetnek az 1. eljárásban leírt bázisok. Alkalmas savak lehetnek szerves savak (például hangyasav, ecetsav, propionsav stb.) és szervetlen savak (például sósav, hidrogénbromid, kénsav stb.) A hidrolízist előnyösebben tömény kénsav; ecetsav és bór-trifoluorid; hidrogén- peroxid és bázis; száraz sósavgáz, majd víz reaktánsok alkalmazásával hajthatjuk végre. A hidrolízist általában valamely szerves oldószerben, vízben vagy ezek keverékében hajtjuk végre. A reakció hőmérséklete nem döntő befolyású és a reakciót általában szobahőmérsékleten vagy melegítés, illetve az oldószer forrásponjára való fűtés mellett végezhetjük. Az (I) általános képletű vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sóit szokásosan alkalmazott eljárással állíthatjuk elő. Például az (I) általános képletű vegyületet, valamely savval reagáltathatjuk. Előnyösen alkalmazható savak (I) általános képletű vegyület gyógyszerészetileg elfogadható sói esetében leírt savak. A (III) általános képletű kiindulási vegyületek és sóik új anyagok és például az előállítási példákban leírt eljárás szerint vagy ahhoz hasonló eljárással állíthatók elő. Az I. általános képletű találmány szerinti vegyületekbe beleértjük sztereoizomerjeit, amelyek a molekulában található szimmetrikus szénatom miatt keletkeznek és a sztereoizomerek valamennyien beletartoznak a találmány tárgykörébe. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű biciklusos vegyületek és gyógyszerészetileg elfogadható sóik 5-lipoxigenáz gátló hatással rendelkeznek(gátolják az SRS-A szintézist) és allergia ellenes szerként, valamint gyulladásgátló szerként és hasonló hatóanyagként alkalmazhatók ember és állatok esetében, közelebbről alkalmasak asztma, pikkelysömör, májgyulladás, hasnyálmirigy-gyulladás, izületi gyulladás, gyulladásos bélbetegség, szeptikus sokk, érelmeszesedés, szívizom infractio, agyi érgörcs és hasonlók kezelésére. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyület hatásosságának bemutatására (I) általános képletű vegyületek képviselőinek farmakológiái vizsgálati adatait közöljük. Tesztvizsgálat; SRS-A (allergiás sokk lassan reagáló anyaga) szintézisében kifejtett inhibitor aktivitás patkány polymorph leukocita (PMN) esetében kalcium-ionfor alkalmazásával. Anyagok és eljárások: PMN előállítása patkányból 250-300 g súlyú hím Sprague-Dawley patkányokat éterrel érzéstelenítünk, majd mindegyiket intraperitoneális úton 20 ml 0,1%-os glikogénnel (Oyster) beoltunk. 20 óra múlva a patkányokat megöljük és a PMN-t kinyerjük a peritoneális üreg öblítésével, amelyet 10 ml Dulbeccos PBS (alkotórészei g/l-koncentrációban: CaCh 0,1, KH2PO4 0,2, MgCl2.6H20 0,1, NaCl 8,0, Na2HP04.7H20 2,16; pH 7,4) oldattal végzünk. Az öblítőanyagot nejlongyapjú szűrőn szűrjük, 5 percig 1000 x g erővel centrifugáljuk. A kivált anyagot Dulbeccos PBS oldatban újra szuszpendáljuk és a sejtkoncentárciót 107 sejt/ml Dulbeccos PBS értékre állítjuk be. PMN stimulálás A találmány szerinti anyagokból mintákat oldunk etanolban és Dulbeccos PBS-ben diszpergálunk és így IO“10—IO-5 mól koncentrációt állítunk be. A23187 antibiotikum; kalcium-ionofor (Dehring Diagnostics) (A továbbiakban A23187) dimetil- szulfoxidban készült oldatát (10 mmól) hígítjuk Dulbeccos PBS oldattal és a koncentrációt 1 mmól-ra állítjuk be. A sejtszuszpenzió mintáját (lxlO7 sejt/ml, 0,98 ml) 30 percig 37 *C-on egyensúlyba hozzuk. Vizsgálandó mintaoldatot (10 mikroliter) adunk hozzá és az elegyet 15 percig inkubáljuk 37 ’C- on, majd 10 mikroliter A23187 oldatot adunk a keverékhez. így az 1 ml végtérfogat körülbelül lxlO7 sejtet, ÍO^-IO-5 mól vizsgálandó mintát és 10 mikroliter A23187-et tartalmaz. Az A23187—tel az inkubálást további 15 percig 37 *C-on folytatjuk. A reakciót a mintacső jeges fürdőbe helyezésével és a lehető leggyorsabb 4 'C-ra hűtésével állítjuk le. A teszvizsgálati csöveket 5 percig 4 ’C-on 1500 x g erővel centrifugáljuk, majd a felülúszót kémcsőbe dekantáljuk és próbában való alkalmazásáig hidegen tartjuk. Az immunreaktiv LTC4(i-LTC4) meghatározása A sejtmentes inkubálási termék felülúszóban az i-LTC-4 koncentrációt specifikus radioimmun kísérlettel határozzuk meg. Mindenegyes minta átlagos Í-LTC4 értékét kiszámítjuk (az egyes inkubálásokat két párhuzamos esetben végeztük el) és a vizsgált minták leukotriének szintézisére kifejtett hatását a minták nélküli kísérletekben kapott határhoz viszonyított százalékban adjuk meg. (2) Eredmények Vizsgált vegyület szám (példaszám) IC50 (m) 5. 2,8 x IO'7 6. 8,7 x IO-9 7. 8,1 x 10-8 8. 1,6 x IO 7 11. 5,0 x 10-8 12. 1,2 x 10"7 13. 1,5 x 10-8 14. 4,2 x !0-8 15. 2,1 x IO'7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
