199766. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 5-lipoxigenáz gátló hatású biciklusos vegyületek, valamint az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199766 B 2 Vizsgált vegyület szám (példaszám) IC50 (m) 16. 3,7 x IO'7 17. 1,9 x lO'6 19. 1,1 x IO'6 20. 8,3 x 10*8 21. 4,3 x IO*7 22. 8,6 x IO*7 23. 1,1 x IO'6 25. 6,2 x IO'7 26. 2,1 x IO'7 27. 3,0 xlO-7 33. 1,4 x IO'8 34. 2,2 x IO 9 35. 6,5 x IO'9 36. 1,2 x 10'7 37. 2,5 x IO'9 38. 3,6 x IO'7 39. 6,4 x IO'7 40. 6,5 x IO'9 41. 5,6 x IO'9 Érelmeszesedést gátló hatás vizsgálata: Nyúl nyaki artéria belső vastagodásának indukciója: 40 db, egyenként kb. 2 kg súlyú hím fehér japán nyulat használtunk a 40. példa szerinti vegyület hatásának vizsgálatára. Az állatokat 5 egyenlő csoportba osztottuk: az egyik csoport kontrollként szolgált, míg a másik négy kapta a hatóanyag különböző dózisait. Az állatokat óvatosan érzéstelenítettük, hogy a környező szövetek ne roncsolódjanak. Az artéria köré 1,5 cm hosszú, 2,15 mm belső átmérőjű, 3,25 mm külső átmérőjű polietilén borítást erősítettünk. A nyulakat 3 héten át standard laboratóriumi étrenden tartottuk, és szükség szerint itattuk. A 40. példa szerinti vegyületet és a hordozóanyagot (0,5 t/tf% metil-cellulózt tartalmazó sóoldat) naponta egyszer intramuszkulárisan adagoltuk, a borítás felvitelének napjától. A 3. hét elteltével az állatokat heparinnal elpusztítottuk (500, ív.), és az artériákat eltávolítottuk, sóoldattal vérmentesre mostuk, 10%-os formalin-oldatba mártva fixáltuk, és 8, egyenként 2 mm hosszú szegmenset vágtunk belőlük. A szegmenseket paraffinba ágyaztuk, és harántirányu metszeteket vágtunk. A metszeteket orceinnel megfestettük. Ily módon minden artériából kb. 70 keresztirányú metszetet készítettünk, melyet a belső érfalvastagodás meghatározására használtunk. A belső érfalvastagodás meghatározása (Intima vastagodási index) Az artéria szekciókat fénymikroszkóppal megvizsgáltuk, és a belső érfalvastagodást a következőképpen értékeltük: 0: nincs vastagodás; 1: enyhe hipeiplázia a szubendotheliális régióban, az intima media arány kb. 1/10; 2: több sejtréteg a szubendotheliális régióban, az intima media arány kb. 1/5, vagy a szubendotheliális régiók egyes részein több hiperplázia; 3: súlyos hiperplázia a teljes szubendotheliális régióban, az intima media arány l/3-nál nagyobb. Mint az az I. tálbázatban látható, a 40. példa szerinti vegyület a dózistól függően gátolta a műanyagborítás által okozott belső érfal-vastagodást. Pontosabban, 10 mg/kg dózisnál a 40. példa szerinti vegyület jelentős gátló hatást fejtett ki. Az intima vastagodási index 0,60 æ 0,21 volt ennél a dózisnál, mely a kontroliénak ,41 æ 0,16 42,5%-a. /. TÁBLÁZAT A 40. példa szerinti vegyület hatása a műanyagborítás által okozott belső érfal vastagodásra. A zárójelbe tett számok a hordozót kapott kontrollállatok átlagértékéhez viszonyított %-os értékek: æ SE (n = 8). 1 = P 0,01, a hordozót kapott kontrolihoz viszonyítva. 1. TÁBLÁZAT folytatás Dózis (mg/kg, i.m.) Intima vastagodási index 0 1,41 ±0,16 (100) 0,01 1,27 ±0,17 (90,1) 0,1 0,71±0,16(50,4)xx 1,0 0,93 ±0,31 (65,9) 10 0,60 ±0,21 (42,5)xx Hatás egerek kísérleti pankreatitiszére Az 5-lipoxigenáz-gátló 40. példa szerinti vegyület hatását vizsgáltuk letális pankreatitisszel szemben, melyet úgy indukáltunk, hogy egereket ehioninnal kiegészített kolin-hiányos táplálékkal (CDE táp) etettünk. 3 hetes nőstény ICR egereket alkalmaztunk a kísérletben. Azok megkezdése előtt minden állatot normál laboratóriumi táppal etettünk. Ezután két napon át CDE tápot adagoltunk, majd további 6 napon át a normál táppal etettük. A 40. példa szerinti vegyületet naponta kétszer, 4 napon át orálisan adagoltuk, a CDE táp adagolásától kezdve. A II. táblázatban összefoglalt eredményekből látható, hogy a 40. példa szerinti vegyület dózistól függően gátolta a CDE-indukált pankreatitisz kifejlődését. Az orálisan a 40. példa szerinti vegyülettel kezelt egerek túlélési értéke 35 illetve 85% volt, 32, illetve 100 mg/kg dózis esetén, míg a kezeletlen egerek közül csak 15% élte túl a kísérletet. II. TÁBLÁZAT Adagolt vegyület túlélés Dózis (mg/kg) %-os túlélés kontroll-15 40. példa szerinti 10 10 vegyület 32 35 100 85 A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerészeti készítmények a szokásos gyógyszerészeti formában, például tabletta, por, finom granulátum, granulátum, drazsé, mikrokapszula, kapszula, kúp, oldat, szuszpenzió, emulzió, szirup és hasonló alakjában állíthatók elő. A formált alakok kívánt esetben 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
