199563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nebramicin és neomicin típusú antibiotikumok előállítására
1 HU 199563 A 2 valamint sok színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A 140 liter sűrítményt, melynek pH-ja 10,38, 500 literre hígítjuk (pH: 10,33), s 1800 liter ammóniumciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán vezetjük át álló ágyban 300 1/óra sebességgel. A gyantaágyat 300 1/óra sebességgel álló ágyban mossuk 8 m3 ionmentes vízzel. A mosóvízben igen sok színanyag és minor komponens távozik. A gyantán megkötött hatóanyagot 2 %-os ammónium-hidroxid oldattal oldjuk le 200 1/óra sebességgel álló ágyban (összesen 5 m3 oldat szükséges). Az apramicin tartalmú eluátumot (térfogata 3 m3) vákuumban 40 *C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 200 liter 16,8 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 33,60 kg apramicin-bázist tartalmaz. A 200 liternyi sűrítmény pH-ját 22 liter 5 mólos kénsavval 5,74 értékre állítjuk, majd 5 kg aktív szénnel derítjük. A szénágyat 50 liter ionmentes vízzel mossuk, majd a szűrletet és a mosóvizet vákuumban 40 *C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 175 liter 23 % szárazanyag tartlmú, azaz összesen 40,25 kg apramicin-szulfátot tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 0,135 A 175 liternyi oldatot hatszoros térfogatú (1050 liter) metanolba csorgatjuk. A kivált apramicin-szulfát kristályokat kiszűrjük, a csapadékot kétszer 100 liter metanollal szuszpendáljuk, majd vákuumban 50 °C-on megszárítjuk a terméket. Kapott késztermék: 40,20 kg apramicin-szulfát. Kihozatal: 1030,8 g/m3 A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: E4%i cm (295 nm) - 0,186 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 5 % Biológiai hatóérték szárazanyagra: 572 pg/mg Azonosítási és tisztasági vizsgálata: VRK-an az Rf értéke megegyezik az összehasonlító (standard) anyag Rf értékével. (Rf - 0,45 24 'C-ra) 6 6. példa 1. példa szerint előállított 2x39 m3 fermentléből (összaktivitása bioautaográfiás értékméréssel 1840 és 1780 E/ml) nyert 12.400 liter illetve 8.400 liter ún. „A” frakciót vákuumban 40 °C-on bepároljuk. Kapott sűrítméy 250 liter 35,1 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 87,75 kg apramicin-bázist, valamint igen sok színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A 250 liternyi sűrítmény pH-ját 50 liter 5 mólos kénsavval 5,6 értékre állítjuk, majd az oldatot hatszoros térfogatú (1800 liter) metanolba csorgatjuk. A kivált apramicin-szulfát kristályokat kiszűrjük, kétszer 200 liter metanollal szuszpendálju, majd a terméket vákuumban 50 *C-on megszárítjuk. Kapott nyerstermék: 105,3 kg apramicin-szulfát. A termék sötét lila színű. A 105,3 kg nyers apramicin-szulfátot 1000 liter ionmentes vízben oldjuk, majd az oldat pH-ját 20 kg nátrium-hidroxiddal 9,52 értékre állítjuk. Az oldatot 3 m3 térfogatra hígítjuk (pH: 9,51) és álló ágyban 300 1/óra sebeséggel 3400 liter ammőnium- ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán vezetjük át. A gyanta ágyat 10 m3 ionmentes vízzel mossuk álló ágyban 300 1/óra sebességgel. A mosóvízzel a színanyagok és a minor komponensek túlnyomó része eltávozik. A gyantán megkötött hatóanyagot 200 1/óra sebeséggel álló ágyban 2 %-os ammónium- hidroxid oldattal (összesen 7 m3-rel) oldjuk le. Az apramicin tartalmú eluátumot (térfogata 3 m3) vákuumban 40 *C-on bepároljuk és ammóniamentesítjük. A kapott sűrítmény 342 liter 20 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 68,40 kg apramicin-bázist, valamint kevés színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A 342 liternyi sűrítmény pH-ját 40 liter 5 mólos kénsavval 5,70 értékre állítjuk, majd 10 kg aktív szénnel derítjük. A szénágyat 50 liter ionmentes vízzel mossuk, majd a szűrlete és a mosóvizet vákuumban 40 “C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 390 liter 22 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 85,80 kg apramicin-szulfátot tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 0,210 A 390 liternyi oldatot hatszoros térfogatú (2340 liter) metanolba csorgatjuk. A kivált apramicin-szulfát kristályokat kiszűrjük, a csapadékot kétszer 200 liter metanollal szuszpendáljuk, majd a terméket vákuumban 50 °C-on megszárítjuk. Kinyert késztermék: 85,60 kg apramicin-szulfát. Kihozatal: 1.097,4 g/m3 A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: E4%i cm (295 nm) - 0,296 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 7,5 % Biológiai hatóérték szárazanyagra: 591 pg/mg. Azonosítási és tisztasági vizsgálata: VRK-an Rf értéke megegyezik az összehasonlító (standard) anyag Rf értékével. (Rf - 0,46 24 °C-on) 7. példa Az 1. példa szerinti eljárással fermentált 39 liter fermentléből (összaktivitása bioautográfiás értékmérésssel 1930 E/ml) nyert 68 liter 7,49 pH értékű neutrális nebramicin szűrt levet az 1. példa szerint átvezetjük 3500 ml ammódium-ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán álló ágyban 2500 ml/őra sebességgel. A gyantát álló ágyban mossuk ionmentes vízzel, majd a gyantán megkötött hatóanyagot 37 liter 0,1 mólos, majd 18,5 liter 0,3 mólos ammónium-hidroxid oldattal eluáljuk le álló ágyban 300 ml/óra sebességgel. Vékonyréteg kromatográfiás vizsgálat alapján elkülönítjük az apramicin tartalmú ún. „A” frakciót, melynek térfogata 9500 ml, pH-ja pedig 10,48 érték. A kapott eluátum 9500 ml 0,5 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 47,50 g apramicin-bázist, valamint sok színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A 10,48 pH értékű 9500 ml apramicin-bázist tartalmazó lila színű oldatot 200 ml/óra sebességgel átvezetjük álló ágyban 500 ml Diaion SP-207 típusú adszorpciós gyantán. A gyantán átfolyó, apramicin tartalmú oldat színe halvány sárga. A gyanta ágyat 250 ml ionmentes vízzel átmossuk. A gyantán átfolyt derített apramicin oldatot és mosóvizet vákuumban 40 *C-on bepároljuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
