199563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nebramicin és neomicin típusú antibiotikumok előállítására
1 HU 199563 A L A bepárolt oldat 310 ml 15 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 46,5 g apramicin-bázist, valamint kevés színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A 310 ml-nyi oldat pH-ját 26 ml 5 mólos kénsavval 5,65 értékre állítjuk, majd 5 g aktív szénnel derítjük. A szénágyat 50 ml ionmentes vízzel mossuk. A szűrletet és a mosóvizet vákuumban 40 ‘C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 230 ml 23,5 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 54,05 g apramicin-szulfátot tartalmaz. Az oldat jellemzó paraméter: E4%i cm (295 nm) - 0,380 A 230 ml-nyi oldatot hatszoros térfogatú (1380 ml) metanolba csorgatjuk. Kivált apramicin-szulfát kristályokat kiszűrjük, a csapadékot kétszer 100 ml metanollal mossuk, majd vákuumban 50 *C-on megszárítjuk a terméket. Kapott késztermék: 53,5 g apramicin-szulfát. Kihozatal: 1,372 g/liter A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: E4%i cm (295 nm) - 0,490 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 9,5 % Azonosítási vizsgálat: VRK-an az Rf értéke megegyezik az összehasonlító (standard) anyag Rf értékével (Rf - 0,46 24 *C-on). Biológiai hatóérték szárazanyagra: 551 |ig/mg. 8. példa A 196.459. számú magyar szabadalmi leírás szerint, streptomyces fradiae NR-8/51 jelű törzzsel (deponálási szám: NCAIMB (P) 000313) fermentált 40 liter neomicin tartalmú fermentlevet (hatóanyag tartalom 10.200 pg/mg) oxálsavval és kénsavval történő savanyítás után pH 2,1 értéken előréteges vákuum dobszűrőn szűrünk, szűrés közben a réteget vízzel mossuk. 72 liter savanyú szűrt levet nyerünk (hatóanyag tartalma 5.600 pg/ml), melynek pH- ját tömény ammónium-hidroxiddal 4,3 értékre állítjuk, s 4x1800 ml ammónium-ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán vezetjük át álló ágyban 2500-2500 ml/óra sebességgel. A gyanta ágyakat 5-5 liter ionmentes vízzel mossuk lebegő ágyban 2500-2500 ml/óra sebességgel. Mindegyik oszlopot 10-10 liter 0,2 mólos ammónium-hidroxid oldanál mossuk lebegő ágyban 1000- 1000 ml/óra sebességgel, majd az oszlopokról a hatóanyagot álló ágyban 200-200 ml/óra sebességgel oldjuk le 2 %-os ammónium-hidroxid oldattal (egyegy oszlop eluálásához 2500-2500 ml oldat szükséges). A neomicint tartalmazó eluátum részleteket egyesítjük. A 4 db oszlopról összesen 6 liter eluátum gyűlik össze. A 6 liter eluátumot vákuumban 40 ‘C-on besűrítjük és ammóniamentesítjük. A kapón sűrítmény 830 ml 27,8 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 230,7 neomicin-bázist, valamint sok színanyagot és minor komponenst tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4*i cm (430 nm) - 6,4 A 820 ml neomicin-bázis tartalmú eluátumot ionmentes vízzel 8000 ml-re hígítjuk. Az oldat pH-ja 10,65. A 10,65 pH értékű hígított eluátumot álló ágyban 500 ml/óra sebességgel átvezetjük 4800 ml ammónium-ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán. A gyanta ágyat álló ágybam 4000 ml ionmentes vízzel mossuk 500 ml/óra sebességgel. A gyantáról elfolyó oldattal és mosóvízzel igen sok színanyag és minor komponens távozik. Ezt jelzi az is, hogy az oldat színe sötétbarna. Az oszlopról elfolyó oldatot és mosó vizet vákuumban 40 ‘C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 22 ml 20 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 4,4 g színanyagot és minor komponens-bázist tartalmaz. A sűrítmény pH-ját 5 mólos kénsavval 6,5 értékre állítjuk (a sűrítményben lévő anyagokat szulfát-sóvá alakítjuk, majd ötszörös térfogatú metanolba (115 ml) csorgatjuk. A kivált csapadékot kiszűrjük, kétszer 10 ml metanollal szuszpendáljuk, majd vákuumban 50 ‘C-on megszárítjuk. A kapott termék 6,14 g színanyag és minor komponens-szulfát. A kinyert tennék fontosabb minőségi jellemzői: Biológiai hatóérték szárazanyagra: 121 NE/mg. Tisztasági vizsgálat: vékonyréteg kromatográfiásan neomicint nem tartalmaz. Feltöltés és mosás közben a neomicin mellől a színanyagok és minor komponensek nagy részét eltávolítottuk a fenti tisztítási művelettel. A 4800 ml gyantán megkötött neomicint álló ágyban 300 ml/óra sebességgel 2 %-os ammónium-hidroxid oldattal eluáljuk le (összesen 9 liter szükséges). A neomicint tartalmazó eluátumot (térfogata 5 liter) vákumban 40 ‘C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 845 ml, 26,7 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 225,6 g neomicin-bázist, valamint igen kevés színanyagot és minor komponenst tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E26-7 %i cm (430 nm) - 1,63 A 845 ml-nyi oldat pH-ját 5 mólos kénsavval (150 ml) 6,75 értékre állítjuk (kialakítjuk a neomicin-szulfátot), majd 20 g aktív szénnel derítjük az oldatot. A szénágyat 100 ml ionmentes vízzel mossuk. A szűrletet és a mosóvizet egyesítve 1020 ml 34,2 % szárazanyag tartalmú oldatot kapunk, mely összesen 348,8 g neomicin-szulfátot tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E34-3 %\ cm (430 nm) - 0,205 A 1020 ml neomicin-szulfát tartalmú oldatot ötszörös térfogatú (5100 ml) metanolba csorgatjuk. A kivált csapadékot szűrjük, kétszer 200 ml metanollal szuszpendáljuk, majd vákuumban 50 *C-on megszárítjuk. A kapott termék: 345,0 g A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: Biológiai hatóérték szárazanyagra: 718 NE/mg Tisztasági vizsgálat: vékonyréteg kromatográfiásan vizsgálva neamin-tartalom 2 % alaltt [a]20D - +56* (c - 0,5; 0,ln kénsav) 9. példa A 8. példa szerint fermentált és szűrt 10 liternyi savanyú neomicin szűrt lé (hatóanyag tartalom 6734 pg/ml) pH-ját 50 ml tömény ammónium-hidoxiddal 8,3 értékre állítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
