199563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nebramicin és neomicin típusú antibiotikumok előállítására
1 HU 199563 A 2 és karbamoil-tobramicin valamint kevés színanyagot és inaktív minor komponenst tartalmaz. A 180 ml „B” frakciót 54 g nátrium-hidroxidal hidrolizáljuk 10 órán át 100 *C-on, majd oldatot az 1. példa szerint 600 ml-re hígítjuk, pH-ját 5 mólos kénsavval (100 ml) 10,58 értékre állítjuk. Az oldatot 3000 ml-re hígítjuk (pH: 10,49), s az 1. példa szerint álló ágyban 300 ml/óra sebességgel átvezetjük 3400 ml ammónium-ciklusban lévó Lewatit CNP-80 típusú gyantán. A gyantaágyat 8 liter ionmentes vízzel mossuk álló ágyban 300 ml/óra sebességgel. A gyantán megkötött hatóanyagot 200 ml/óra sebességgel álló ágyban eluáljuk 2 %-os ammóniumhidroxid oldattal (összesen 7 liter szükséges). A hatóanyagot tartalmazó eluátumot (térfogata 3500 ml) vákuumban 40 *C-on bepároljuk és ammóniamentesítjük. A kapott sűrítmény 200 ml 29,2 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 58,40 g tobramicint és kanamicint tartalmaz. A kapott 200 ml térfogatú sűrítményt 500 ml-re hígítjuk,, pH-ját 5 mólos kénsavval 7,50 értékre állítjuk, s az 1. példa szerint különítjük el a komponenseket 1500 ml ammónium-ciklusban lévő Varion KCO típusú gyantán. A tobramicin tartalmú frakciókat (térfogata 15 liter) vákuumban bepároljuk. A kapott sűrítmény 155 ml 15,5 % szárazanyag tartlmú, azaz összesen 24,03 g tobramicin-bázist tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 0,490 Az oldatot 2 g aktív szénnel derítjük, a szénágyat 50 ml ionmentes vízzel mossuk, végül a szűrletet és a mosóvizet vákuumban 40 *C-on 35,5 % szárazanyag tartalomra pároljuk. A kapott sűrítmény 62 ml 35,5 % szárazanyagtartalmú, azaz összesen 22,01 g tobramicin-bázist tartalmaz. Az oldatból ismert kristályosítási módszerrel nyerjük ki a szilárd tobramicin-bázis készterméket. Kapott késztermék: 17,16 g tobramicin-bázis hatóanyag. Kihozatal: 0,440 g/liter A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: E4 **i cm (295 nm) - 0,195 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok egyenkénti nagysága és intenzitása): 1 % Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok egyenkénti nagysága és intenzitása): 2,5 % Biológiai hatóérték szárazanyagra: 985 pg/mg [<x]20d - +150' (c - 1, víz) 4. példa Az 1. példa szerint fermentált 39 liter fermentléből (összaktivitása bioautográfiás értékméréssel 2000 E/ml) nyert 67 liter 9,3 pH értékű neutrális nebramicin szűrt levet hőcserélőn átvezetünk és 60 'C-ra , melegített szűrt levet 3500 ml ammónium-ciklusbanlévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán vezetjük át álló ágyban 2500 ml/óra sebességgel. Ioncsere közben a duplikált ioncserélő oszlopot 60 *C-on, állandó hőmérsékleten tartjuk. A hatóanyag megkötése után a gyantaágyat 2500 ml/óra sebességgel álló ágyban 12 liter 60 'C-os ionmentes vízzel mossuk. A mosóvízben igen sok színanyag és inaktív minor komponens távozik. A hatóanyagot 37 liter 0,10 mólos, majd 19,5 liter 0,3 mólos, hőcserélőn 60 'C-ra előmelegített ammónium-hidroxid oldattal eluáljuk állő ágyban 300 ml/óra sebességgel. A karbamoil-kanamicin és karbamoil-tobramicin tartalmú ún. „B” frakciót vákuumban 40 'C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 154 ml 36,2 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 55,75 g kaibamoil-kanamicint és karbamoil-tobramicint, valamint kevés színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A 154 ml „B” frakciót 45 g nátrium-hidroxiddal hidrolizáljuk 10 órán át 100 'C-on. Hűtés után az oldatot 600 ml-re hígítjuk, s pH-ját 5 mólos kénsavval 10,50 értékre állítjuk (100 ml). Az oldatot 3000 ml-re hígítjuk (pH: 10,45), majd az 1. példa szerint átvezetjük 3400 ml ammónium-ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán álló ágyban 300 ml/óra sebességgel, mossuk álló ágyban 300 ml/óra sebességgel, végül a hatóanyagot 2 %-os ammónium- hidroxid oldattal leoldjuk. A hatóanyagot tartalmazó frakciókat vákuumban bepároljuk és mammóniamentesítjük. A kapott vizes hidrolizátum 190 ml 25 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 47,50 g tobramicint, kanamicint, valamint igen kevés színanyagot és minor komponenst tartalmaz. A hidrolizátumot az 1. példa szerint kromatografáljuk 1500 ml ammónium-ciklusban lévő Varion KCO típusú gyantán. A tobromicin tartalmú frakciókat vákuumban 40 'C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 191 ml 13 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 24,83 g tobramicin-bázist tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 0,430 Az oldatot 2 g aktív szénnel derítjük, a szénágyat 50 ml ionmentes vízzel mossuk, végül a szűrletet és a mosóvizet vákuumban 35,5 % szárazanyag tartalom pároljuk. A kapott sűrítmény 66 ml 35,5 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 23,43 g tobramicin-bázist tartalmaz. Ebből az oldatból ismert módon, oldószerből történő kristályosítással nyerjük a szilárd tobramicin-bázis készterméket. Kapott késztermék: 18,33 g tobramicin-bázis hatóanyag. Őiozatal: 0,470 g/liter A kinyert tennék fontosabb minőségi jellemzői: E4*i cm (295 nm) - 0,151 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok egyenkénti nagysága és intenzitása): 1 % Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 2 % Biológiai hatőérték szárazanyagra: 996 pg/mg. [<x]20d- +150' (c- 1, víz) 5. példa Az 1. példában nyert 14.500 liter apramicin tartalmú eluátumot, az ún. „A” frakciót vákuumban 40 'C-on bepároljuk és ammóniamentesítjük. A kapott „A” sűrítmény 140 liter 30 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 42,00 kg apramicin-bázist. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
