199563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nebramicin és neomicin típusú antibiotikumok előállítására
1 HU 199563 A 2 Kapott késztermék: 21,30 kg kanamicin-szulfát. Kihozatal: 546,15 g/m3 A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: E4%i cm (295 nm) - 0,145 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 4,5 %, Rf (24 °C): 0,15. Biológiai hatóérték szárazanyagra : 625 pm/mg. A kromatográfia során kapott tobramicin tartlmú frakciókat (térfogata 20,8 m3) vákuumban 40 "C-on bepároljuk és ammóniamentesítjük. A kapott sűrítmény 163 liter 15,0 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 24,45 kg tombramicin-bázist tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 0,570 Az oldatot 2 kg aktív szénnel derítjük, a szénágyat 50 liter ionmentes vízzel mossuk, végül a szűrlete és a mosóvizet vákuumban 40 °C-on 35,5 % szárazanyag tartalomra bepároljuk. A kapott sűrítmény 64 liter 35,5 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 22,72 kg tobramicin-bázist taratalmaz. Ebből az oldatból ismert módon, etil-alkoholból történő kristályosítással nyerjük a szilárd tobramiinbázis készterméket. Kapott késztermék: 17,55 kg tobramicin-bázis hatóanyag. Kihozatal: 450 g/m3 A kinyert termék fontosabb minőségi jellemzői: E4%i cm (295 nm) - 0,124 Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok egyenkénti nagysága és intenzitása): 0,5 % Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 1,5 % [aj^D - +149° (c - 1 víz) 2. példa Az 1. példa szerinti fermentált 39 m3 fermentlé (összaktivitása bioautográfiás értékmérései 1872 E/ml) szűrése, ioncseréje, eluálása és az eluátum bepárlása után nyert 210 liter 39 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 81,90 kg karbanoil- kanamicint, karbamoil-tobramicint, valamint sok minor komponenst és színanyagot tartalmazó ún. „B” frakciót 60 kg nátrium- hidroxidda hidrolizálunk 10 órán át 100 °C-on. A hirolizátum pH- ját 25 °C-ra való hűtés után 160 liter 5 mólos kénsavval 10,6 értékre állítjuk, majd az oldatot hatszoros térfogatú (2820 liter) metanolba csorgatjuk. A kivált nátrium-szulfát csapadékot centrifugán különítjük el a hatóanyagot tartalmazó vizesmetanolos felülúszótól. A csapadékot 1000 liter metanollal mossuk. Az összes metanolos oldatot vákuumban 40 °C-on oldószermentesítjük és pároljuk be. A kapott vizes hidrolizátum 190 liter 43,5 % szárazanyagtartalmú, azaz összesen 82,65 kg kanamicint, tobramicint, sok minor komponenst és színanyagot, valamint kevés nátrium-szulfátot tartalmaz. A 190 liter kanamicin és tobramicin tartalmú oldatot 800 literre hígítjuk, a pH-t 5 mólos kénsavval 7,48 értékre állítjuk. A komponenseket az 1. példa szerinti különítjük el 1500 liter ammónium-ciklusban lévő Varion KCO gyantán. A tobramicin tartalmú frakciókat (térfogata 21,2 m3) vákuumban bepárljuk és ammóniamentesitjük. A kapott sűrítmény 162 liter 15,0 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 24,30 kg tobramicin-bázist tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 1,540 A 162 liter 15,0 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 24,30 kg tobramicin-bázist tartalmazó oldatot, melynek pH-ja 10,74, 1080 liter ammónium-ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán vezetjük át álló ágyban 10 1/óra sebességgel. A gyantaágyat előbb 10 1/óra sebességgel (összesen 300 liter), majd 50 1/óra sebességgel (összesen 1200 liter) ionmentes vízzel mossuk álló ágyban. A mosóvízben sok színanyag és minor komponens távozik. Vizes mosás után a gyantán megkötött hatóanyagot 2 %-os ammónium- hidroxid oldattal oldjuk le álló ágyban 100 1/óra sebességgel (összesen 4 m3 oldat szükséges). A kapott 2000 liternyi hatóanyagot tartalmazó eluátumot vákuumban 40 °C-on bepároljuk és ammóniamentesítjük. A kapott sűrítmény 145 liter 16,0 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 23,20 kg tobramicin-bázist tartalmaz. Az oldat jellemző paramétere: E4%i cm (295 nm) - 0,548 Az oldatot 2 kg aktív szénnel derítjük, a szénágyat 50 liter ionmentes vízzel mossuk, majd a szűrlete és a mosóvizet 35,5 % szárazanyag tartalomra pároljuk be vákuumban 40 °C-on. A kapott sűrítmény 62 liter 35,5 % szárazanyag tartalmú, azaz összesen 22,01 kg tobramicin bázist tartalmaz. Az oldatból ismert kristályosítási módszerrel nyerjük a szilárd tobramicin-bázist. Kapott késztermék: 16,80 kg tobramicin-bázis hatóanyag. Kizozatal: 430,8 g/m3 A kinyert termék fontosabb minőségi paraméterei: E4%i cm (295 nm) - 0,132 Tisztasági viszgálat: VRK (idegen foltok egyenkénti nagysága és intenzitása): 1 % Tisztasági vizsgálat: VRK (idegen foltok együttes nagysága és intenzitása): 2 % Biológiai hatőérték szárazanyagra: 990 pm/mg [a]20D - +147° (c - 1, víz) 3. példa Az 1. példa szerint fermentált 39 liter fermentléből (összaktivitása bioautográfiás értékméréssel 1840 E/ml) nyert 65 liter 7,52 pH értékű neutrális nebramicin szűrt lés pH-ját 10 mólos nátrium-hidroxid oldattal 10,45 értékre állítjuk. Az oldatot álló ágyban 2500 ml/óra sebességgel átvezetjük 3500 ml ammónium-ciklusban lévő Lewatit CNP-80 típusú gyantán. A hatóanyag megkötése után a gyantaágyat 2500 ml/óra sebességgel álló ágyban mossuk (összesen 13 liter) ionmentes vízzel. A mosóvízben igen sok színanyag és inaktív minor komponens távozik. A hatóanyagot 37 liter 0,1 mólos, majd 21 liter 0,3 mólos ammónium-hidroxid oldattal oldjuk le 300 ml/óra sebességgel. A karbamoil-kanamicin és karbamoil-tobramicint tartalmú ún. „B” frakciót vákuumban 40 °C-on bepároljuk. A kapott sűrítmény 180 ml 36 % szárazanyag tartalmú, azaz össszesen 64,80 g karbamoil-kanamicin 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
