199505. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, a 17-es helyzetben 3-,4-vagy 6-tagú spiro-gyűrűt tartalmazó szteroidok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
13 HU 199505 B 14 ciklohexán/etil-acetát 70:30 arányú keverékét alkalmazzuk. Az első adagból 0,750 g terméket izolálunk. Op.: 234°C. (alfa)D=+270±3,5° (c=0,5% CHC13) NMR spektrum (CDC13) 2,92 ppm: dimetil-amino H-ja 5,8 ppm: H4 4,33 ppm: H,, 0,6 ppm: H,g 2,63 és 2,98 ppm: oxirán H-ja 6,67 és 7,01 ppm: aromás. 5. példa (17S)-11 -béta- [4-(metil-tio)-fenil] -spiro- (ösztra-4,9-dién-17,2’-oxirán) -3-on A lépés 5-alfa-hidroxi-l 1 -béta- [4- (metil-tio) -fenil]-ösztr-9-én-3,17-dion ciklikus 3,3- ( 1,2-etándiii) -acetálja 0,672 g réz(II)-kloridot, 0,212 g lítium-kloridot, 165 cm3 vízmentes tetrahidrofuránt és 16,5 g 5-alfa,10-alfa-epoxi-ösztr-9(ll)-én-3,17-dion ciklikus 3,3- ( 1,2-etándiil)-acetált —6°C-ra hűtünk. Az elegyhez cseppenként 1 óra 15 perc alatt hozzáadunk 100 cm3 0,75 mólos 4- (metil-tio)-fenil-magnézium-bromid oldatot. Inert atmoszférában —10°C-on egy órát kevertetjük a reakcióelegyet, majd 100 cm3 telített ammónium-klorid oldatot adunk hozzá és újabb 10 percig kevertetjük. Az elegyet ezután etil-acetáttal extraháljuk, vízzel mossuk, szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot kevés hexánnal felvesszük, szűrjük, hexánnal mossuk, majd 60°C-on egy órán keresztül vákuumban szárítjuk. 22,2 g nyersterméket kapunk. Op.: 202°C. A nyersterméket szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluálószerként ciklohexán/ /etil-acetát 1:1 arányú keverékét alkalmazzuk, amely 0,001 trietil-amint is tartalmaz. A terméket etil-acetátból átkristályosítjuk és így 209°C-on olvadó termékhez jutunk. B lépés 5-alfa-hidroxi-11 -béta- [4- (metil-tio) -fenil]-spiro (ösztr-9-én-17,2’-oxirán) -3-on ( 17S)ciklikus ( 1,2-etándiil)-acetálja 12,7 cm3 0,9 mólos kálium-terc-butilát oldatot, 22 cm3 tetrahidrofuránt, 27 cm3 vízmentes dimetil-szulfoxidot 5°C-ra hűtünk. Néhány perc alatt hozzáadunk 2,2 g trimetil-szulfónium-jodidot és 30 percig 5°C-on kevertetjük az elegyet. Ezután 5±l°C-on 7 perc alatt hozzáadjuk 2,45 g fentiekben előállított termék 30 cm3 vízmentes tetrahidrofuránnaí készített oldatát és egy órán keresztül 0—5°C közötti hőmérsékleten kevertetjük az elegyet. Ezután azt 300 cm3 vízre öntjük, etil-acetáttal extraháljuk, telített vizes nátrium-klorid oldattal mossuk, szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot 15 cm3 etil-éterrel felvesszük, jégre öntjük, elválasztjuk, kevés hideg dietil-éterrel eldörzsöljük, vákuumban szárítjuk és így 2,1 g kívánt terméket kapunk. Op.: 130°C. IR spektrum (CHC13) OH : 3508 cm"1 aromás : 1592 cm 1 1555 cm-1 1493 cm“' C lépés ( 17S) -11 -béta- [4- (metil-tio) -fenil] -spiro(ösztra-4,9-dién-17,2’-oxirán)-3-on 2,1 g előzőekben előállított terméket inert atmoszférában 100 cm3 etanolban oldunk. Hozzáadunk 4,2 g Amberlite IRC 84 gyantát (Rhom-Haas termék) és az elegyet reflux hőmérsékleten 15 óra 30 percig tartjuk. Lehűtés után szűrjük, etanollal mossuk, a szűrletet bepároljuk, egy órán keresztül hidegen tartjuk, elválasztjuk és kevés hideg etanollal eldörzsöljük. A terméket ezután vákuumban szárítjuk és 0,49 g anyagot izolálunk. Op. 121 — 122°C. Etanol/metilén-klorid 4:5 arányú keverékéből átkristályosítjuk és így a termék olvadáspontja 122, majd 167°C. UV spektrum (EtOH) MW 406,6 max. 259. nm e= 15,700 max. 300 nm e= 18,700 NMR spektrum (CDC13) 2,43 ppm: CH3S 5,76 ppm: H4 4,32 ppm: H,, 0,55 ppm: Hlg 2,61 és 2,94 ppm: oxirán H-ja 7,02 és 7,13 ppm: aromás A találmány szerinti vegyfiletek farmakológiái vizsgálata A találmány szerint előállított vegyületek hormon receptorokra gyakorolt hatásának vizsgálata: Nyúl méhének progesztogén receptora Kb. 1 kg-os nemileg érett nőstény nyulakat 25 g ösztradiollal kezelünk bőrön át. 5 nappal ezután a kezelés után az állatokat leöljük, a méhüket kivesszük, mérjük és 0°C-on homogenizáljuk Potter-féle teflon edényben TS puffer oldatban (10 mmól trisz, 0,25 mól szacharóz, HCl, pH=7,4) (1 g szövetet veszünk 50 ml TS-hez). A homogenizátumot azután .ultracentrifugaÍjuk (105 000 gX X 90 perc) 0°C-on. Az így kapott felülúszókból alikvot mennyiségeket inkubálunk 0°C-on, t ideig, állandó koncentrációjú (T) triciummal jelzett termékkel (R)-(17,21-dimetil-19-nor-4,9-pregnadién-3,20-dion) növekvő koncentrációjú (0—2500 X 10-9 mól) vagy hideg R vagy hideg progeszteron, vagy hideg vizsgálandó termék jelenlétében. Ezután valamennyi inkubált mintában mérjük a triciummal jelzett kapcsolt R termék koncentrációját (B) a dextrán szén adszorpciós módszerre]. Patkány timuszának glukokortikoid receptora Hímnemű 160—200 g-os Sprague-Dawley EPOS patkányokat megfosztunk mellékveséjüktől. 4—8 nappal ezután a művelet után az állatokat megöljük és a timuszukat kivesszük, majd homogenizáljuk 0°C-on pufferben, amely 10 mmól íriszt, 0,25 mól szacharózt, 2 ml ditiotreitolt és 7,4 pH-jú sósavat 5 10 15 20 25 30 35 40 46 50 55 60 65 8
