199502. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új purin-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 199502 B A meghatározás során C8166 sejtekben (humán CD4+ T limfoblasztoid vonal) hid - rogén-karbonát-puffert, antibiotikumokat és 10%-os magzati szarvasmarha szérumot tartalmazó RPMI 1640 táptalaj felhasználásával tenyésztett HTLV-III-t alkalmazunk. A sejtszuszpenziót a vírus TCD50 értékének tízszeresével megfertőzzük, majd az adszorpciót 37°C-on 90 percen át lejátszatjuk. A sejteket a közeggel háromszor mossuk. A tesztet 6 ml-es szövettenyészet-csövekben végezzük el; minden cső 1,5 ml táptalajban 2X X105 fertőzött sejtet tartalmaz. A tesztvegyületeket oldhatóságuktól függően vizes közegben vagy dimetil-szulfoxidban oldjuk és a teszt-vegyület 15 pl-nyi oldatát adagoljuk be. A tenyészeteket 37°C-on 72 órán át inkubáljuk 5% szén-dioxidot tartalmazó levegőben. A tenyészeteket centrifugáljuk, majd a felüluszó aliquot részét Mónidét P40-el szolubilizáljuk és utána antigén befogási meghatározásnak vetjük alá: ennek során a virális fehérje 24-el szemben különös reaktivitást mutató primer antiszérumot és torma peroxidáz kimutatási rendszert alkalmazunk. A szín kialakulását spektrofotometriásán mérjük és a tesztvegyület koncentrációja függvényébn ábrázoljuk. Az 50%-os védelmet előidéző koncentrációt meghatározzuk (IC50 illetve IC90). A citotoxicitás meghatározása a színezékfelvételen alapul és a metabolizmust vagy radioaktív jelzett aminosav beépülést a fenti meghatározásból nyomonkövetjük, a vírusellenes hatás szelektivitásának meghatározása céljából. A fenti teszttel kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze. I. Táblázat Tesztvegyület; példa sorszáma IC50 (pmól) 1. 1 7 1 2. 10 3. 1 3 A találmányunk szerinti eljárással előállítható purinszármazékokat a gyógyászatban a hatóanyagot és megfelelő inert gyógyászati hordozóanyagot tartalmazó készítmények alakjában alkalmazhatjuk. A gyógyászati készítmények orálisan (pl. tabletták, drazsék, kemény zselatinkapszulák, lágy zselatinkapszulák, oldatok, emulziók vagy szuszpenziók) vagy parenterálisan (pl. injekciós oldatok) alkalmazhatók. Hordozóanyagként inert szervetlen vagy szerves hordozók alkalmazhatók. A tabletták, drazsék és kemény zselatinkapszulák hordozóként pl. laktózt, kukoricakeményítőt vagy származékait, talkumot, sztearinsavat vagy sóit stb. tartalmazhatnak. A lágy zselatinkapszulák készítésénél hordozóanyagként pl. növényi olajokat, viaszokat, zsírokat, félszilárd és folyékony poliolokat stb. alkalmazhatunk. Az oldatok és szirupok hordozóanyagként pl. vizet, poliolokat, szacharózt, invert cukrot, glükózt stb. tartalmazhatnak. Az injekciós oldatok készítésénél hordozóanyagként pl. vizet, alkoholokat, poliolokat, glicerint, növényi olajokat stb. alkalmazhatunk. A találmányunk szerinti eljárással előállítható gyógyászati készítmények szokásos gyógyászati adjuvánsokat is tartalmazhatnak, pl. tartósító-, szolubilizáló-, stabilizáló-, nedvesítő-, emulgeáló-, édesítőszereket, színezőanyagokat, ízesítőanyagokat, az ozmózisnyomás változását előidéző sókat, puffereket, bevonatokat vagy antioxidánsokat. A gyógyászati készítmények továbbá más gyógyászatiig értékes anyagokat is tartalmazhatnak. Az (I) általánqs képletű purinszármazékok dózisát az adott hatóanyag hatáserősségétől, a kezelendő állapot súlyosságától és a beteg szükségleteitől függően a kezelő orvos határozza meg. A napi dózis általában kb. 0,1—20 mg/kg testtömeg, előnyösen kb. 0,2—15 mg/kg testtömeg, különösen előnyösen kb. 0,4—10 mg/kg testtömeg. Megjegyezzük, hogy a fenti tartományok csupán tájékoztató jellegűek és az alkalmazandó dózis esetenként kisebb vagy nagyobb is lehet. Az (I) általános képletű purinszármazékokat egyszerre (egy dózisban) vagy — előnyösen — több részletben (pl. 2—6 alkalommal naponta) adagolhatjuk. A hatóanyagot adagolási egységenként előnyösen kb. 0,5— 300 mg, előnyösen kb. 1,0—300 mg, különösen előnyösen kb. 2,0—200 mg (I) általános képletű purinszármazékot tartalmazó készítmények alakjában formálhatjuk. A találmányunk szerinti eljárással a gyógyászati készítményeket oly módon állíthatjuk elő, hogy valamely (I) általános képletű purinszármazékot vagy amidját vagy Schiff-bázisát és kívánt esetben egy vagy több további gyógyászatilag értékes anyagot inert gyógyászati hordozóanyagokkal összekeverünk és a keveréket a kívánt galenikus formára hozzuk. A gyógyászati készítmények előállítása önmagukban ismert módszerekkel történik. Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa 0,39 g 6-amino-2-klór-9-(2,3-dideoxi-2-fluor-5-0-tritil-ß-D-treopentofuranozil)-9H-purin 24 ml vízmentes diklór-metánnal képezett oldatát jéggel hűtjük és 2,2 ml 0,35 mólos kloroformos klór-hidrogén-oldattal kezeljük. A reakcióelegyet 0—5°C-on 15 percen át keverjük, majd szobahőmérsékleten másfél órán át keverjük és utána vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml dietil-éterrel kezeljük és a szuszpenziót 30 percen át keverjük. Az oldhatatlan fehér szilárd anyagot leszűrjük és dietil-éterrel mossuk. 0,16 g 6-amino-2-klór-9- - (2,3-dideoxi-2-fluor-ß-D-treopentofuranozil) - -9H-purint kapunk. A nyersterméket vízben 3 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 05
