199468. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kondenzált diazepinonok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 199468 B vagy a vérnyomásemelkedést (M,) 50%-kai csökkenti, grafikusan ábrázoljuk. Az eredmények a III. táblázatban láthatók. 3. Nyálelválasztást gátló hatás patkányon Lavy és Mulder módszere szerint [Arch. Int. Pharmacodyn., 178, 437—445, (1969)] 1,2 g/kg uretánnal narkotizált hím THOM-patkányoknak a vegyüiet növekvő dózisait adjuk be intravénásán. A nyálelválasztást 2 mg/kg poiikarpin szubkután adásával váltjuk ki. A nyálat szűrőpapírral felitatjuk és a nyálfolt területét 5 percenként planimetriásan meghatározzuk. A vegyületnek a nyáltérfogatot 50%-kai csökkentő dózisát grafikusan ábrázoljuk. Az eredmények a III. táblázatban láthatók. B. A muszkarinreceptorokhoz való kötődés vizsgálata 1. in vitro: az ICS0*értékek meghatározása Szervforrásként 180—220 g testtömegű hím Sprague-Dawley patkányokat használunk. A szív és a szubmandibuláris kivétele után minden további lépést jéghideg Hepes-HCl-pufferben (pH=7,4; 100 millimólos nátrium-klorid, 10 millimólos magnézium-klorid) hajtunk végre. A teljes szivet felaprítjuk egy ollóval. Ezután minden szervet homogenizálunk egy edényben. A kötődési vizsgálathoz a szervhomogenizátumokat a következőképpen hígítjuk: teljes szív 1:400 szubmandibuláris 1:400 A szervhomogenizátumok inkubálását Eppendorf centrifugálócsövekben 30°C-on végezzük meghatározott radioaktív lig^andum koncentrációnál és a nem radioaktív vizsgálati anyagok egy koncentrációsorozatával. Az inkubációs idő 45 perc. Radioaktív ligandumként 0,3 nanomólos 3H-N-metil-szkopolamint (3H-NMS) alkalmazunk. Az inkubálást jéghideg puffer adagolásával és ezt követő vákuumszüréssel fejezzük be. A szűrőt hideg pufferrel öblítjük és meghatározzuk radioaktivitását. Ez jelzi a 3H-NMS specifikus és nem-specifikus kötődéseinek összegét. A nem-specifikus kötődés részarányát úgy definiáljuk, mint az a radioaktivitás, amely 1 pmólos kinuklidinil-benzilát jelenlétében megkötődik. Mindig 4 meghatározást végzünk. A meg nem jelölt vizsgálati anyagok IC50-értékét grafikusan határozzuk meg. Ez a vizsgálati anyagnak azt a koncentrációját mutatja, amely 50%-kai csökkenti a 3H-NMS specifikus kötődését a muszkarinreceptorokon a külön19 böző szervekben. Az eredmények az 1. táblázatban láthatók. 2. in vivo: az IDS0-értékek meghatározása Ezekhez a kísérletekhez körülbelül 200 g testtömegű nőstény patkányokat használunk. A kísérletek megkezdése előtt az állatokat 1,25 g/kg uretándózis adagolásával narkotizáljuk. Az állatok a vizsgálandó vegyüiet előirányzott dózisát mindig intravénás injekcióban kapják meg. 15 perc múlva ha:: nió módon beadunk 113 nanog/kg 3H-N i »ai-szkopolamint. További 15 perc múlva az állatokat megöljük, a szívet, a hörgőket és a könnymirigyeket eltávolítjuk. Ezeket a szerveket feloldjuk Soluene R-ben és meghatározzuk a radioaktivitást. A mért értékeket vesszük a teljes kötődésnek. A nem-specifikus kötődés részarányát úgy definiáljuk, hogy ez az a radioaktivitás, ami 2 mg/kg atropin adagolásával nem szorítható ki. Ezekből a kísérletekből ID50-értéket kapunk az egyes szervekre. Az ID50-értékek a vizsgálandó anyag azon dózisai, amelyek egy szerv muszkarinreceptorain a 3H-NMS specifikus kötődését 50%-kal csökkentik. Az eredmények az V. táblázatban láthatók. Az előbbi módszerekkel vizsgáltuk meg például a következő vegyületeket: A = 5,11-dihidro-l l-{[ (2-(2-( (dipropi!-aminő) -metil)-l -piperidinil)-etil)-amino] - -karbonil]-6H-pirido[2,3-b] [ 1,4] benzodiazepin-6-on, B = 4,9-dihidro-4-[[(2-(2-((dietil-amino)-metil) -1 -piperidinil) -etil) -amino] -karbonil}-3-metil-10H-tieno[3,4-b] [l,5]benzodiazepin-10-on, C = 5,11 -dihidro-9-klór-11 -{[ (2-(2-( (dietil-amino) -metil)-1-piperidinil)-etil )-amino] -karbonil]-6H-pirido [2,3-b] [ 1,4] benzodiazepin-6-on, és összehasonlító vegyü letekként X = 5,11-dihidro-l 1 -{[2-( (dietil-amino) -metil)-1-piperidinil] -acetil}-6H-pirido[2,3- -b] [1,4] benzodiazepin-6-on (4 550 107 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), Y = 5,11-dihidro-l 1 ( (4-metiI-l -piperazinil)-acetil)-6H-pirido [2,3-b] [1,4] benzodiazepin-6-on (pirenzepin: 3 660 380 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), és Z = atropin. Az eredményeket a következő táblázatok tartalmazzák. 20 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
