199458. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-morfolinil-1H-indol-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
i i LJ i i_/ 6. lépés EtiI-(2RS,6RS) 6- [2,3-dihidro-l-(fenil-metil) -lH-indoI-4-il] -4-metil-2-morfolin-karboxilát 8,03 g előző lépésben előállított vegyületet 70 ml metilén-kloridban feloldunk, majd —40°C-ra lehűtjük, majd inert atmoszférában 9,13 g N-klór-diizopropil-amint hozzáadunk és az elegyhez lassan 11 ml trisz-dimetil-amino-foszfint adagolunk. —40°C hőmérsékleten 15 percig reagálni hagyjuk. Az elegyet 70 ml metilén-kloriddal hígítjuk, vízzel mossuk. Ezután nátrium-klorid telített vizes oldatával mossuk, szárítjuk és bepároljuk, majd szilikagélen kromatografáljuk (eluens: benzol.etil-acetát 7:3 -j- 0,5 trietil-amin). Ily módon 4,706 g kívánt terméket állítunk elő (Rf=0,12). 7. lépés Etil-(2RS,6RS) 6- (2,3-dihidro-1 H-indol-4- -il)-4-metil-2-morfolin-karboxilát Az előző lépésben kapott termékből 4,7 g-t feloldunk 235 ml ecetsavban, és hozzáadunk 1,18 g 10% szénre felhordott palládiumot. A hidrogénezés egy óra alatt lezajlik, majd az elegyet leszűrjük, szárítjuk, 200 ml vízbe adjuk és tömény ammónia oldattal 9 pH-t beállítjuk. Az extrakciót metilén-kloriddal végezzük. Az extraktumot szárítjuk, bepároljuk és izopropanolból végzett átkristályosítás után 2,683 g kívánt terméket állítunk elő. Op.: ~ 92°C. 6. példa A következő vegyületet tartalmazó tablettát állítjuk elő: 4-[ (2R-cisz) -4-meti!-6- [ (metil-tio) -metil] -2- -morfolinil]-lH-indol (dl) semleges fumarát sója 10 mg tablettához szükséges adalékok 100 mg (adalékok: laktóz, keményítő, talkum, magnézium-sztearát) 1.) A T-labirintus vizsgálata a septo-hippokampusz részleges sérülése után Elmélet: Hím patkányoknál a septo-hippokampusz idegsejtjeinek elektrolitikus részleges sérülését váltjuk ki, így egy T-labirintusban szerzett megismerő képesség megszűnik, majd a megzavart emlékezőképesség helyreállításának sebességét mérjük. Az állatok a —9 — —6 napokon hozzászoktak a környezetükhöz, a —5 és —4 napon pihentek, majd a tanulás a —3 és 0 napokon történt. A 0 napon a patkányok 75—80 százaléka mutatott pozitív reakciót, majd a sérülést előidéztük. Ezután az állatok a +1 — +3 napokon pihentek. A -f-4 napon ellenőriztük az állatokat, ekkor az állatoknak csak az 50%-a adott pozitív választ (reakciót). A +5 — -|-8 napokon a patkányokat megvizsgáltuk, amikor is a vizsgálat előtt egy órával vizsgálati anyaggal kezeltük őket. 6 9 A -(-11 napon a patkányokat kezelés nélkül vizsgáltuk. Eredmény A pozitív reakciót mutató kezelt állatok százalékát a nem kezelt állatokhoz történő viszonyításból határoztuk meg. A 4. példa szerint előállított vegyület 20 mg/kg dózjsa az emlékező képesség jelentős jávulását váltja ki. 2. ) Enoláz vizsgálat A sérült agyi sejtek yy enolázt szabadítanak fel, amely a sérült idegsejtek jellegzetes indikátora. A sérülést úgy idézzük" elő, hogy egerekben szubkután módon 35 nig/kg dózisban kainsavat injekciózunk. A termék vizsgálatára a neurotoxin injektálása előtt egy órával intraperitonálisan 1 mg/kg kainsavat adagolunk. Az agyi sejtek védelmezője a sérült területen csökkenti az enoláz koncentrációját. Eredmény A 4. példa szerint előállított termék 1 mg/ /kg dózisnál 34%-kai csökkenti a y? enoláz koncentrációját. így ez a vegyület az idegsejtek védelmezője. 3. ) Az idegsejtek aktivitásának vizsgálata Az idegsejtek aktivitása fokozza a megfelelő metabolizmust, amelyet a glükózfelhasználás is jelez, és nő az energiafelhasználás. Ezt a növekedést megítélhetjük az idegsejtekben felgyülemlő 2-dezoxiglükóz 6- -foszfát mennyiségéből. Ez a 2-dezoxi glükóz C14 vegyület a hexokináz átalakulásából származik, és a glükóz analógiájára nyomnyi dózisú adagoláskor ugyanazon az úton lép a sejtbe, mint a glükóz. Megfigyelhető, hogy a 4. példa szerint előállított termék hatására a patkányok hippokampuszában fokozó dik a 2-dezoxi-glükóz 6-P felhalmozódás. Ennek megfelelően a vegyület szelektíven aktiválja bizonyos mezolimbikus rendszerek metabolizmusát. 4. ) Akut toxikusság vizsgálata A különböző vizsgált vegyületek letális LD0 adagját megbecsülhetjük, ha a vegyületeket az egereknek orálisan adagoljuk. Azt a maximális adagot, amely 8 napon belül még nem okoz pusztulást, LD0-nak nevezzük. Az eredményt a következő táblázat szemlélteti: 10 Példa LD0 mg/kg 2 >200 3 >400 4 20U 5 >200 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
