199444. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-izopropoxi-izoflavon-ciklodextrin zárványkomplex és abból gyógyszerkészítmény előállítására
HU 199444 B „B“ tabletta komplex (40 mg Ipriflavon tartalommal) PVP 7 370 mg 15 mg 385 mg 5 „C“ tabletta: Ipriflavon Béta ciklodextrin PVP 200 mg 330 mg 20 mg 10 550 mg A kioldódási vizsgálatok eredményeit a III. táblázat szemlélteti. A hagyományos eljárással készült tablettából csak 0,62 mg Ipriflavon oldódott ki, míg az 1/5 mennyiségű hatóanyagot béta ciklodextrin komplex for- 20 májában tartalmazó tablettából több mint a 2-szeresére növekedett a kioldódott hatóanyag mennyiség, és már 2 perc alatt 30%-al túlhaladta a hagyományos tablettával elérhető maximális kioldódási értéket. Amennyiben 25 mechanikai keverék formájában tartalmazta a tabletta az Ipriflavont, és a béta ciklodextrint akkor ez lassúbb kioldódási sebességet eredményezett, de a kioldott hatóanyag mennyiség még így is nagyobb volt, mint a hagyó- 30 mányos tabletták esetében. A felszívódási kísérleteket CFY hím patkányokon végezték. Az állatok tömege 170 és 200 gramm között volt. Bekezdés előtt az állatokat 16 órán át éheztettük, bekezdés után 35 vizet és patkánytápot ad libitum fogyaszthattak. Az állatoknak 25 mg/kg-os dózisban adtuk azlpriflavont és hatóanyagra nézve ekvimoláris dózisban az 1. példa szerint előállított Ipriflavon béta ciklodextrin komplexet. A to- 40 vábbiakban a csak Ipriflavonnal kezelt állatokat A csoportnak, a keverékkel kezeiteket C csoportnak és az Ipriflavon-béta ciklodextrin komplexei kezeiteket B csoportnak jelöljük. A bemért anyagokat 5 percig kevertettük 2 ml 1%-os metilcellulóz oldatban és az állatoknak gyomorszondán át adtuk be. Plazmamintákat a bekezdés után 10, 30 perccel, valamint 1,2 és 4 óra elteltével éterrel altatott állatok Vena femoralisának átmetszésével, el- 50 véreztetéssel gyűjtöttük. A véreket heparinozott csövekbe engedtük, majd centrifugáltuk. A plazmákat leszivattuk és a további feldolgozásig ampullázva mélyhűtőben tároltuk. Vizeletminták gyűjtése céljából bekezdés 55 után az állatokat egyedi metabolizmus edényekben helyeztük el, ahol a vizeletet és a székletet 24 órán át szeparáltan gyűjtöttük. A vizeletmintákat a további feldolgozásig ampullázva mélyhűtőben tároltuk. HPLC-vel kö- „ vettük a plazmában és a vizeletben a változat- 60 lan Ipriflavon és a fő metabolitjának (7-hidroxi-izoflavon) koncentrációját. A méréseket HP 1082B típusú folyadékkromatográffal, RP-18-as 20 cm-es (plazmaminták esetén 10 pm-es, vizeletminták eseté- 65 ben 5 pm-es szemcseméretű) Lichro dított fázisú kolonnával végeztük. P áramlási sebessége 1,5 ml/perc volt.. tatható hullámhosszú UV detektort 2 állítva használtuk és a kromatogn 0,2 cm/perces papírsebesség mellett v Eluens a 0,05 mólos acetátpuffer és acetonitril (Intérkémia) plazmamir tében: 60:40, vizeletminták esetében 5Ï nyú elegye volt. Belső standardként a -7-metoxi-4’-nitro-izoflavon 100 pg/mi centrációjú etilalkoholos oldatát has A kalibrációhoz a 7-hidroxi-izofl 100 pg/ml-es és 10 pg/ml-es metanol tot készíthetünk. A plazmaminták analízise céljábi plazmához 1 ml pH 5-ös acetátpuffert ■ desztillált vízzel 10-szeresére hígítói -glukuronidáz/arilszulfatáz enzimet (1 adtunk és 24 órán át 37°C-on inkL Inkubálás után 50 pl 2N NaOH hozz után 8 ml benzollal extraháltuk és centi tűk. A szerves fázist leszivattuk, a vize 400 pl IN HCl-lel savanyítottuk, a bels dard oldatból 10 pl-t adtunk hozzá és 8 ml benzollal extraháltuk. Ezt a b( fázist centrifugálás után bepároltuk, radékot 100 pl eluensben oldottuk és injektáltunk. A plazmakalibrációs egyenlete: y=8,2x—0,08, korrelációs ke 0,9999. A vizeletminták analízise céljából • vizelethez 0,5 ml pH 5-ös acetátpuff 10 pl bétá-glukuronidáz (arilszulfatáz met) (1000 FU) adtunk és 24 órán át 37 inkubáltuk. Inkubálás után 150 pl 2N N adtunk hozzá és 8 ml benzollal extrah centrifugáltuk. A szerves fázist leszív majd a vizes fázist 400 pl IN HCl-lel sa' tottuk, a belső standard oldatából 50 pl tünk hozzá és újabb 8 ml benzollal ext tűk. Ezt a benzolos fázist centrifugálás bepároltuk és a maradékot az eluens 1(-ében visszavettük. Ebből az oldatból 1 injektáltunk a folyadékkromatográfba. A letkalibrációs egyenes egyenlete: y—0,911 x—0,09, korrelációs koefic: 0,9995. A IV. táblázat a változatlan Ipriflavc V. táblázat pedig a fő metabolit koncenti ját szemlélteti az állatok vérében. Az A cs a szabad Ipriflavont kapta, a B csop( komplexet, a C csoport pedig Ipriflavon cs béta ciklodextrin keverékét. A változatlan Ipriflavont mérni plazmában csak a B csoport esetében tudtuk minden időpontban. Az érték 50 és 500 ng=nanogramm közé esik. Az A csoportban, hasonlóan a C csoporthoz változatlan Ipriflavont mérni csak néhány időpontban tudtunk (2 és 4 óránál). A fő metabolitot követve a B csoportban minden időpontban 10—20-szeres plazmaszintet értünk el, az A és a C csoport azonos időpontban mért értékeihez viszonyítva. Az értékek a B csoportban 3 és 20 pg/ml között, az A és C csoportban 8 5
