199391. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-guanidino-szubsztituált aminosavszármazékok előállítására

HU 199391 B

A nyers peptidet nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, Licroprep Rp-18 (25—40 mikron) töltetű, 2,5X X100 cm-es oszlopon. Az oszlop ekvilibrálását 0,03 mól/1 ammónium-acetátot tartalmazó 35% ciano-metánból és 65% vízből álló futtató pufferrel (pH 4,5) végezzük. A fő UV-abszorbeáló csúcsot (280 nm), mely a háromszoros oszloptérfogat közelében eluálódik, szárazra pároljuk, és desztillált vízből háromszor liofilezzük. 75 mg tiszta N-Ac-L-Pro-D-p-F-Phe-D-Nal (2) -Ser-Tyr-D-Dia-Leu-Arg-Pro-GlyNH2 peptidet kapunk ecetsavas só formájában /a/£*=—15,4° (c= =0,5, ecetsav).

Hasonló módon eljárva, az 1., 2., 3. és

6. aminosavat a megfelelő aminosavval helyettesítve állítjuk elő az alábbi LHRH-analógokat is:

[N-Ac-D-p-Cl-Phe1,2, D-Trp3, D-Wsh6] LHRH Olvadáspont: 150—Í55°C [a]205=—17,9° (c=0,25, ecetsav).

Elemanalízis eredmények a C^H^N^O^Cl-j összegképlet alapján (M: 1685,84): számított: C%=56,99, H%=7,87, N%=15,79 talált: C%, H% alacsony.

Aminosav analízis:

Ser, 0,86 (l);Pro, 1,08 (1); Gly, 1,04 (1); Leu, 0,97 (1); Tyr, 0,91 (1); NH3, 1,32; Trp, 0,31 (1); Arg, 0,99 (1); D-p-Cl-Phe, 1,34 (2);

Megjegyzés: D-Wsh 340 perc alatt sem jön le az oszlopról.

[N-Ac-D-Nal(2)\ D-p-F-Phe2, D-Trp3, D-Wsh®] LHRH Olvadáspont: 150—154°C [a]p5=—28,3° (c=0,55, ecetsav). Elemanalízis eredmények a C84H118N,90,7F összegképlet alapján (M: 1685): számított: C%=59,88, H%=7,06, N%=15,79 talált: C%, H% alacsony.

Aminosav analízis:

Ser, 0,87 (1); Pro, 0,94 (1); Gly, 1,05 (1); Leu, 0,99 (1); Tyr, 0,95 (1); D-p-F-Phe, 0,90 (1); NH3, 1,34; Trp, 0,68 (1); Arg, 1,00 (1); D-Nal(2), 0,846 (1); Megjegyzés: D-Wsh 340 perc alatt sem jön le az oszlopról.

A képletekben

Wsh jelentése N-guanidino-etil-N’-gua-nidino-dimetil-amino-propil-homoarginil-csoport,

D-Nal (2) jelentése 3-(2-naftil)-D-alanil-csoport,

D-p-F-Phe jelentése p-fluor-D-fenilalanil-csoport,

D-p-Cl-Phe jelentése p-klór-D-fenilalanil-csoport, és

Trp jelentése triptofanilcsoport,

Ac jelentése acetilcsoport,

és

LHRH jelentése (piro)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 szekvenciájú dekapeptid.

9

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás a (II) általános képletű N-guanidino-szubsztituált aminosavszármazékok — a képletben

n értéke 1, 2, 3, 4, 5 vagy 6,

R, jelentése -NHR3 általános képletű csoport, az utóbbi képletben

R3 jelentése 1—5 szénatomos alkilcsoport vagy 4—8 szénatomos cikloalkilcsoport R2 jelentése 1—5 szénatomos alkilcsoport vagy 4—8 szénatomos cikloalkilcsoport, vagy

R, és R2 összekapcsolódva a köztük lévő )C=N-csoporttal együtt (f) képletű gyűrűt alkot —,

és karboxilcsoportjukon fenil (1—4) szénatomos) alkil-csoporttal, és/vagy a-amino-csoportjukon 1—4 szénatomos alkoxi-karbonil-csoporttal, vagy fenil-(1—4 szénatomos) alkiloxi-karbonil-csoporttal védett származékaik, valamint savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy

a) olyan (II) általános képletű vegyületek előállítására, amelyek képletében R, jelentése -NHR3 általános képletű csoport,

az utóbbi képletben

R3 jelentése 1—5 szénatomos alkilcsoport vagy 4—8 szénatomos cikloalkilcsoport

R2 jelentése 1—5 szénatomos alkilcsoport vagy 4—8 szénatomos cikloalkilcsoport,

egy (Hl) általános képletű, adott esetben a tárgyi körben megadott védőcsoporttal védett aminosavat — a képletben n értéke a tárgyi körben megadott — vagy annak savaddíciós sóját egy (IV) általános képletű karbodiimiddel — a képletben

R2 és R3 jelentése a tárgyi körben megadott —

reagáltatunk, vagy

(b) egy fenti (III) általános képletű, adott esetben a tárgyi körben megadott védőcsoporttal védett aminosavak vagy annak sóját egy (V) általános képletű izotiokarbamiddal — a képletben R, és R2 jelentése a tárgyi körben megadott —

reagáltatunk, és kívánt esetben

(i) egy kapott (II) általános képletű vegyület amino- és/vagy karboxil-védőcsoportját eltávolítjuk,

vagy

(ii) egy kapott, szabad aminócsoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyület aminocsoportját védjük.

(Elsőbbsége: 1982.12.21.)

2. Eljárás a (II) általános képletű N-guanidino-szubsztituált aminosavszármazékok — a képletben

10

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

6