199291. lajstromszámú szabadalom • Eljárás xantinszármazékot és o-acetil-szalicilsavat tartalmazó, szinergetikus hatású gyógyszerkészítmények előállítására
9 10 HU 199291 B Az lb. táblázat a különböző időközökkel történő alkalmazás hatását mutatja; az le. táblázatban az egyéb alkalmazott xantinszármazékok hatását foglaltuk össze. Értékelés: Meghatároztuk az egy definiált trombus indukálásához szükséges lövetek számát. Lő- 10 vet-frekvencia: egy-egy lövet 2 percenként; megszámláltuk és mértük az egész megfigyelési időszak folyamán képződött, legalább a véredény-rádiusz 1/4-ének megfelelő nagyságú trombusokat. 15 A kísérleti eredmények statisztikai értékelése a X*-teszt segítségével (vö.: L. Cavalli-Sforza, Biometrie, Stuttgart, 1969., 49. és kőv. old.) történt. Eredmények: A kapott eredményeket az alábbi la-lc. táblázatban foglaltuk össze. Az acetil-szalicil- 25 sav vagy a pentoxifillin 5 mg/kg orális egyedi adagjai még nem szignifikáns hatásúak, mimellett azonban a pentoxifillin már 20%-os trombusképződés-gátlást mutat. 10 mg/kg orális adagban már mindkét anyag szignifi- 30 káns hatással rendelkezik. A pentoxifillin és acetil-szalicilsav egyidejű beadása a lézermodellen nem mutatott hatást. Ugyanez volt a helyzet, araikor először az acetil-szalicilsavat, majd 1 óra múlva a pentoxifillint adtuk be. 35 Ezzel szemben ha először a pentoxifillint, majd 1 óra múlva az acetil-szalicilsavat adtuk be, akkor az adagok nagyságától függő, szignifikáns hatás mutatkozott a lézerrel a patkány-mezenterium arterioláin és venoláin 40 kiváltott trombózismodellen. Az időben elkülönített gyógyszer-alkalmazásnak az egyes gyógyszerek önmagukban történő beadása útján elért additiv hatással szembeni fokozott hatás világosan látható a kontrollállatok- 45 kai szembeni összehasonlításban mutatkozó százalékos változás alapján (la. táblázat). Az lb. táblázatban felsorolt eredmények mutatják, hogy a kétféle gyógyszer beadása közötti időköz széles határok között változ- 50 tatható, az optimális eredmények 15 perctől 180 percig terjedő időközök esetén mutatkoznak. Más, az igénypontokban emlitett xantinszármazékokkal is elérhetők a találmány szerinti hatások, ha ezeket a xantinszármazéko- 55 kát az acetil-szalicilsavtól időben elkülönitetten adjuk be. Számos ilyen xantinszármazék trombózis-ellenes hatását az le. táblázat adatai mutatják. A kétféle hatóanyag időben elkülönített 60 alkalmazása egy a kereskedelmi forgalomban beszerezhető, két elkülönítve vezérelhető kamrával dolgozó perfúzor-egységgel történhet (ilyen készüléket például a Braun cég, Melsungen, állít elő; a készülék egy időbeál- 65 litó órával külön vezérelhető motorokkal hajtott adagolószerkezettel dolgozik). A perfúzor-berendezés két kamrájába egyrészt pen- Loxifillin-oldatot (a patkány testsúlyára számitva 10 mg/kg pentoxifillinnek megfelelő mennyiségben), másrészt 1 mg/kg testsúlynak megfelelő mennyiségű acetil-szalicilsav-oldalot töltünk (a fentebb megadott oldószerekkel). A pentoxifillin-oldat injekciója után (amelyet a patkány farki vénájába adunk be) 20 perc múlva következik az acetil-szalicilsav-oldatnak a kapcsolóóra által vezérelt beadása. Az összehasonlító kísérletben mindkét kamra tartalmát egyidejű injekcióban adjuk be. Az eredmények megfelelnek az orális beadással folytatott kísérlet során kapott mérési eredményeknek, vagyis a két szer időben elkülönített beadása esetén elért hatások messze meghaladják az egyidejű beadással elérhető hatásokat. Ex vivo vizsgálatok: A trombocita-aggregáció mértékét önmagukban ismert módszerekkel határoztuk meg. Him nyulakat (saját tenyésztés, BASK, SPF Wiga törzs, kb. 2,5-3,5 kg testsúly) intravénásán, a fül vénáján keresztül fiziológiás konyhasóoldattal készített pentoxifillin-oldattal és/vagy DL-lizin-monoacetil-szalicilát oldattal kezeltünk. Ezt követően a fül vénájából vért vettünk, ehhez 9:1 arányban 3,8%-os trinátrium-citrát-oldatot adtunk és szobahőmérsékleten 45 percig inkubáltuk. 10 perc múlva az elegyet percenként 1000 fordulattal centrifugáltuk. A vérlemezkékben gazdag plazmából álló felső réteget elkülönítettük és az alsó réteget további 10 percig centrifugáltuk percenként 28 000 fordulattal. Az igy kapott felső réteg vérlemezkékben szegény plazmából állt, ezt is elkülönítettük. A vérlemezkékben gazdag plazmát a vérlemezkékben szegény plazma hozzáadása útján körülbelül 6.108 és 7.10® vérlemezke/ml koncentrációra hígítottuk (a mérés Coulter Counter készülékkel, a Coulter Electronics cég, Krefeld, gyártmánya, alkalmazásával történt). A vérlemezke-aggregációt optikai úton figyeltük meg, a fényáteresztésnek egy Born-féle agregométer (Labor GmbH, Hamburg) segítségével történő mérése útján. A kísérleti anyag mennyisége 0,25 ml volt, a kísérletet 37 °C hőmérsékleten végeztük. Az aggregációt 2.10*4 mól arachidonsavval (Serva, Heidelberg) váltottuk ki; ezt a szert argon védógázatmoszférában tisztítottuk preperativ nagynyomású folyadék-kromatográfiás eljárással .HPLC Reversed Phase’ C-18-oszloppal. A trombocita-aggregáció megnövekedését a fényáteresztés mérése útján követtük. Ebben a kísérleti rendszerben a mért paraméter a maximális E aggregáció-amplitúdó volt. A kapott eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 7
