199159. lajstromszámú szabadalom • Eljárás véralvadásgátló peptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
199159 ban vagy előnyösen tiszta diklór-metánban hajtjuk végre. Amennyiben nem teljes kapcsolás történik, a kapcsolási eljárást megismételjük az alfa-aminosav védőcsoport eltávolítása és a következő aminosav szilárd fázisú reaktorban való kapcsolása előtt. A kapcsolási reakció végbemenetelét az egyes lépésekben minhidrin reakcióval ellenőrizzük az E.Kaiser és munkatársai Analyt. Biochem. 34 , 595 (1970) közleményében leírt eljárásnak megfelelően. Miután a kívánt aminosav szekvenciát előállítottuk, a pepiidet eltávolítjuk a gyantáról. Ezt hidrolízissel végezhetjük. Például a gyantához kötött potipeptidet dimetil-szulfid, p-krezol és tiokrezol híg vizes sósavas oldatának alkalmazásával távolítjuk el. Mint a szakirodalomból ismert a szilárd fázisú peptidszintézis során számos olyan aminosav fordul elő, amely olyan funkciós csoportokat tartalmaz, amelyeket a lánc szintézise során védőcsoporttal kell ellátni. A megfelelő védőcsoportok kiválasztása a szakember számára ismert és függ a védőcsoporttal ellátandó aminosav minőségétől, valamint a peptiden található védett aminosavaktól. Az ilyen oldallánc védőcsoportok kiválasztása alapvető fontosságú, mert olyan csoportnak kell lennie, amely az alfa-aminósav védőcsoportjának eltávolításakor nem hasad le. Például alkalmas oldallánc védőcsoportok a lizin esetében a benziloxi-karbonil-csoport, és a szubsztituált benziloxi-karbonil-csoportok, amelyen a szubsztituens lehet halogénatom (például klóratom, brómatom, fluoratom), és nitrocsoport (például 2-klór-benziloxí-karbonil-csoport, p-nitro-benziloxi-karbonil-csoport, 3,4-diklór-benziloxi-karbonil-csoport), tozilcsoport, t-amiloxi-karbonil-csoport, t-butoxi-karbonil-csoport és diizopropil-metoxi-karbonil-csoport. A treonin és szerin alkoholos hidroxilcsoportja esetében acetilcsoport, benzoilcsoport, t-butil-csoport, tritilcsoport, benzilcsoport, 2,6-diklór-benzil-csoport vagy benziloxi-karbonil-csoport védőcsoportokat alkalmazhatunk. Előnyösen alkalmazható csoport a benzilcsoport. A védőcsoportokat a szakirodalomban jólismert módszerekkel távolíthatjuk el. A védőcsoport eltávolítás jellemzően akkor történik, amikor a peptid lánc szintézise befejeződött, de a védőcsoportok kívánt időpontban máskor is eltávolíthatók. A találmány szerinti eljárással előállított vérálvadásgátló hatású peptid származék dózisa 0,2—250 mg/kg testsúly/nap a betegtől, a kezelt trombózis súlyosságától és az alkalmazott peptid származéktól függően. Egy adott beteg esetében alkalmazandó dózis könnyen meghatározható. Általában előnyösen napi 1—4 dózist alkalmazunk általában 5 mg — 100 mg aktív hatóanyag/dózis mennyiségben. A véralvadásgátló kezelést alkalmazhatjuk számos trombózisos megbetegedés keze7 lésére vagy megelőzésére, különösen a szívkoszorúér és az agyi érrendszeri megbetegedések esetében. A szakterületen dolgozó orvosok könnyen felismerik, hogy mikor szükséges véralvadás gátló terápia alkalmazása. A beteg elnevezés alatt emlősöket értünk, például főemlősöket az embert is beleértve, valamint például juhok, lovak, szarvasmarhák, disznók, kutyák, macskák, patkányok és egerek értendők. Ugyan néhány találmány szerinti peptid származék nem bomlik el az orális alkalmazás után a bélrendszeren való áthaladás során, a feltalálók előnyösen a nem orális úton történő adagolást javasolják. Ilyen lehet például a szubkután, az intravénás, az intramuszkuláris, vagy intraperitoneális adagolás; a tartalék injekció formájú adagolás; a beültetett készítmény alkalmazása; vagy a nyálka membránokon mint például orr, torok vagy tüdő hörgőkön keresztül történő alkalmazás, amely például a találmány szerinti eljárással előállított peptid származékot aeroszol formában szpré vagy száraz por alakban tartalmazza. A parenterális alkalmazás esetében a vegyületeket injektálható oldat vagy szuszpenzió formában . adagolhatjuk. Ez a vegyület és fiziológiásán elfogadható hígítóanyagot, valamint gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz, amely lehet víz és olajok és tartalmazhat felületaktív anyagokat és egyéb gyógyszerészetileg elfogadható adalékanyagokat. Alkalmazható olaj például a nyersolaj, amely lehet állati, növényi vagy szintetikus olaj, mint például mogyoróolaj, szójaolaj és ásványi olaj. Általában az injektálható oldatok készítésekor előnyösen víz, sóoldat, vizes dextróz és hasonló cukor oldatok, etanol és glikolok, mint például propilén-glikol vagy polietilén-glikol alkalmazhatók folyékony hordozóanyagként. A tartalék injekció vagy beültetett készítmény formában alkalmazott anyag esetében olyan formát kell létrehozni, amely lehetővé teszi az aktív hatóanyag hosszantartó kibocsátását. Az aktív hatóanyagot bevonattal látják el és labdacs vagy kis henger formájúvá alakítják, majd szubkután vagy intramuszkuláris tartalék injekció vagy beültetett formában viszik a szervezetbe. A beültetett készítmények inert anyagokat tartalmazhatnak, amelyek lehetnek például biológiailag lebontható polimerek, vagy szintetikus szilikonok, például Silastic, szilikon gumi, amelyet a Dow-Corning Corporation állít elő. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. 1. példa H-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr- -Leu-GIn-OH előállítása A pepiidet szilárdfázisú eljárással 0,1 mmól 0,66 mmól/g Boc-Gln-PAM gyanta alkalmazásával állítjuk elő. Kétszeres szimmetrikus 8 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
