199152. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfonát- és foszfonamid-endopeptidáz-inhibitorok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
199152 ban, jégfűrdőbe h/elyezzük, és nitrogéngáz alatt cseppenként beadagoljuk 3,3 g (11,12 mmól) 4-[[(S)-2-amino-3-fenil-l-oxo-propil] -amino] -benzoesav-metil-észter, valamint 165 mg (1,11 mmól) 4-( 1 -pirrolidinil)-piridin 15 ml vízmentes metilén-dikloriddal készült oldatát. Ezt követően hozzáadunk még 1,43 g ( 11,12 mmól) etil-diizopropil-amint 15 ml vízmentes metilén-dikloridban oldva, az elegyet 1 óra hosszáig hidegen kevertetjük, majd éjszakára hagyjuk szobahőmérsék^ letre melegedni. Másnap bepároljuk, a párlási maradékot 500 ml etil-acetátban oldjuk és mossuk 100—100 ml 10%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, megint vízzel, majd nátrium-klorid-oldattal, magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A fenti módon kinyert 4,0 g nyersterméket 400 g Merck 9385 kovasavgélen flash-kromatográfiával tisztítjuk, eluensként toluol és ecetsav 6:1 arányú elegyét használva. A tisztított 4- [ [(S)-3-fenil-2- [(metil-metoxi-foszfiniI)-amino] -1-oxo-propil] -amino] -benzoesav-metil-észter tömege 2,9 g. Szilikagélen, toluol-ecetsav 4:1 eleggyel kromatografálva, vékonyréteg-kromatográfiás fy-értéke: 0,36. e) 4-[ [(S)-3-fenil-2-[(hidroxi-metiI-foszfinil)-amino] -1-oxo-propil] -amino] -benzoesav dilítiumsója 2,5 g (6,4 mmól), a d) pontban ismertetett módon előállított metil-észtert feloldunk 45 ml metanolban, jégfürdőbe helyezzük, és nitrogéngáz alatt hozzácsepegtetünk 9,6 ml (19,2 mmól) 2 N lítium-hidroxid-oldatot. Az adagolás befejeztével az elegyet 15 percen át hidegen kevertetjük, majd éjszakára hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Vákuumban bepárolva a reakcióelegyet 3,0 g nyersterméket kapunk, amelyet több részletben egy 2,5x20 cm-es, HP-20 gyantával töltött oszlopon kromatografálva tisztítunk. Az oszlop feltöltéséhez és az eluáláshoz is vizet használunk oldószerként. Az oszlopról visszakapott részlegesen tisztított termék mennyisége 2,33 g, amelyet most egy LH-20 adszorbens vizes szuszpenziójával töltött, 5x30 cm méretű oszlopra viszünk és vízzel eluáljuk. Az így tisztított 4- [ [ (S)-3-fenil-2- [ (hidroxi-metil-foszfinil)-amino] -1-oxo-propil] -amino]-benzoesav dilítiumsó fehér, 250°C felett olvadó anyag, melynek tömege 2,9 g, [oc]d= =-70° (c=0,5, metanol). Szilikagél vékonyrétegen, izopropil-alkohol, víz és ammónium-hidroxid 12:2:1 arányú elegyével kifejlesztve a kromatogramot, a termék foltjának magja 0,22 R/-értéknél jelenik meg, nyomokban található, 0,61 R/-értékű szennyezés mellett. 9. példa 4- [ [ ( S ) -2- [ [ (2-Fenil-etil )-hidroxi-foszf inil] - -amino] -1-oxo-propil] -amino]-benzoesav dilítiumsója a) 4-[[(S)-2-[(terc-Butoxi-karbonil)-amino] -1-oxo-propil] -amino] -benzoesav-metíl-észter 23 8,52 g (45,4 mmól) metil-(4-amino-benzoát)-hidrokloridot feloldunk 55 ml vízmentes N,N-dimeti!-formamidban, és hozzáadjuk az alábbi reagenseket: 8,6 g (45,4 mmól) N-(terc-butoxi-karbonil)-L*alanin, 6,95 g (45,4 mmól) l-hidroxi-benzotriazol*H20 és 5,87 g (45,4 mmól) etil-diizopropil-amin. Az elegyet jégfürdővel hűtjük, és nitrogéngáz alatt hozzáadunk 9,37 g (45,4 mmól) diciklohexil-karbodiimidet, majd 1 óra hosszat hidegen kevertetjük, éjszakára pedig hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. 150 ml dietil-éterrel meghígítva az elegyet kiszűrjük a diciklohexil-karbamidot, a szűrletet bepároljuk, és a maradékot 500 ml etil-acetátban feloldjuk. Ezt az oldatot mossuk 100—100 ml 10%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, megint vízzel, majd nátrium-klorid-oldattal, végül magnézium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk, aminek eredményeként 14,9 g nyersterméket kapunk. A nyerstermék tisztítását úgy végezzük, hogy 60 ml metilén-dikloridot adunk hozzá és az oldhatatlan anyagot szűrjük, miáltal 5,5 g fehér 4- - [ [ (S) -2- [ (terc-butoxi-karbonil)-amino] -1- -oxo-propil] -amino] -benzoesav-metil-észtert kapunk, amelynek olvadáspontja 186—188°C. Szilikagél vékonyrétegen, hexán és etil-acetát 2:1 arányú elegyével kromatografálva, Rp=0,26. b) 4-[ ](S)-2-Amino-l-oxo-propil] -amino]-benzoesav-metil-észter-hidroklorid 5,4 (16,75 mmól) a) pont szerinti metil-észtert feloldunk 50 ml 1,7 N ecetsavas hidrogén-klorid-oldatban, a lombikot lezárjuk, és 6 óra hosszat szobahőmérsékleten kevertetjük az oldatot. Vákuumban bepárolva és a párlási maradékot dietil-éterrel eldörzsölve, 4,2 g 4-[ [ (S)-2-amino-l-oxo-propil]-amino] - -benzoesav-metil-észter-hidrokloridot kapunk, amelynek olvadáspontja 250°C felett van. Szilikagél vékonyrétegen, klroform-metanol-ecetsav 5:1:1 arányú eleggyel kromatografálva, R/=0,38. c) 4-[[(S)-2-[[(2-Fenil-etil)-metoxi-foszfinil] -amino] -1-oxo-propil] -amino] - -benzoesav-metil-észter Hozzávetőlegesen 16,1 mmól, a 6. példa d) pontjában leírtak szerint előállított klór-foszfonátot feloldunk 25 ml vízmentes metilén-dikloridban, az oldatot jégfurdőbe helyezzük, és nitrogéngáz atmoszférában hozzáadunk4,15g (16,10 mmól) fenti b) pont szerinti metil-észtert, valamint 239 mg (1,61 mmól) 4- ( 1 -pirroíidinil) -piridint 45 ml vízmentes metilén-dikloridban oldva. Ezután a kapott oldathoz csepegtetjük 4,16 g (32,2 mmól) etil-diizopropil-amin 18 ml vízmentes metilén-dikloriddal készült oldatát, az elegyet 1 óra hosszat hidegen kevertetjük, éjszakára hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 400 ml etil-acetátban, mossuk 75—75 ml 10%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, még egyszer vízzel, majd nátrium-klo-24 13 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
