198952. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emlős agyalapi mirígy eredetű növekedési hormon kibocsátást elősegítő faktor (PGRF) előállítására
1 HU 198952 B 2 A további vizsgálatok azt mutatják, hogy a szintetikus PGRF(1—44); és a szintetikus PGRF(1 — 44)-amid lényegében azonos potenciállal rendelkezik, mint a natív PGRF(1 —44). A szintetikus PGRF(l-44)-amid, amikor laboratóriumi állatokba (patkányokba) injektáljuk, azonos típusú GH-kibocsátó aktivitást mutat, mint amelyet a PGRF(1 —40) fejt ki a 7. példa II. táblázatában, de mintegy 2,5 - 3-szorosan hatásosabb súly-alapon számolva, mint a PGRF(1- — 40)-szabad sav. Az Egyesült Államokban körülbelül 7000- —15000 gyermek közül egyről ismeretes, hogy agyalapi mirigy-eredetű növekedési hormon hiánnyal küzd, vagyis "agyalapi mirigy törpe", azaz ezek azért törpék, mert az agyalapi mirigy eredetű GH normális szintje nincs meg a vérükben. Klinikai bizonyítékok azt mutatják, hogy ezeknek a betegeknek a többsége normális agyalapi miriggyel rendelkezik, és problémáik oka a hipotalamus eredetű, GH kibocsátást elősegítő faktor szintézisének vagy kiválasztásának hiánya. A szintetikus PGRF-től az várható, hogy ideális kezelést ad azokban az esetekben, amelyekben korábban emberi agyalapi mirigy eredetű GH-t alkalmaztak kezelésként injekció formában, egy rendkívül drága, emberi agyalapi mirigyből boncolásnál nyert készítménnyel. A DNS-rekombináns módszerrel nyert humán GH, bár az irodalomból már ismeretes, még nem áll rendelkezés re rutin alkalmazásra. A szintetikus PGRF sokkal egyszerűbb molekula és alkalmazása jelentős előnyöket mutat bárhol a világon, ahol az ilyen "agyalapi mirigy-törpék" száma százakra vagy ezrekre becsülhető. Mivel a szintetikus PGRF az első ismeri molekula, amely fajlagosan képes felismerni az agyalapi mirigy GH-kiválasztó funkcióját, ez jelentheti az első rutin-vizsgálatot a GH-kiválasztáshoz minden olyan esetben, amelyben az orvos az agyalapi mirigy funkciójának fajlagos defektusára gyanakszik. A szintetikus PGRF ezért a jövőben helyettesítheti a diagnosztikai eljárásként jelenleg használt nehézkes módszereket (arginin inúzió, hípoglikémia, L-DOPA injekció stb.) a GH kiválasztóképesség becslésében. A szintetikus PGRF fontos lehet minden olyan esetben a klinikai gyógyászatban, amelyben az orvos előnyben szeretné részesíteni a pozitív nitrogén-egyensúlyt és anabolizmusl, ilyen pl. a sebgyógyulás, a kiterjedt égések kezelése, nagyobb műtétet követő poszt-operatív periódusok, és az általános gyengeség egyéb orvosi szituációi, beleértve a gerontológiai gyakorlatnak, valamint a koraszülött csecsemők gyógyászati gyakorlatának több szindrómáját. A GH kiválasztás elősegítése fontos a szilárd tumorok erősebb besugárzásos terápiája közben és utána a betegekben, részben elősegíteni az anabolizmusl, részben a GH hatásának előnyeit igénybe venni a vérképző rendszer nyeles sejtjeinek stimulálására. Az emberekbe történő adagoláshoz a PGRF peptideknek legalább 93%-os tisztaságúnak, előnyösen 98%-os tisztaságúnak kell lenniök. Ez a tisztaság azt jelenti, hogy a szóban forgó pepiid alkotja az összes jelenlevő peptid és peptidfragmens említett tömeg%-át. A biológiailag aktív peptidek legtöbbjéről úgy találták, hogy más biológiai aktivitással is rendelkeznek, mint amelyekhez ezeket eredetileg felismerték. Tekintettel az ilyen példákra, valószínű, hogy a PGRF-ről is azt fogják találni, hogy az agyalapi mirigyen kívül is van aktivitása, amely gyakorlati jelentőségű. Bár a PGRF-et humán hasnyálmirigy tumorból izoláltuk és extraháltuk, az általános tapasztalat és a kísérletek alapján azt hisszük, hogy a PGRF(l-44)-amid aminosav-szekvenciája azonos a humán hipotalamuseredetű, GH-kibocsátást elősegítő faktor szék venciájával. A szintetikus PGRF peptidek rendszeres adagolása háziállatokba vagy más melegvérű állatokba várhatóan elősegíti az anabolizmust és így növeli a testsúlyt az izomtömeg vonatkozásában. A tenyésztett halak és más hidegvérű tengeri állatok gyorsított növekedése szintén előirányozható. Az állatoknak 5% tisztaságú anyag beadása is elfogadható. A szintetikus PGRF vagy nem toxikus sói, gyógyászatilag elfogadható hordozóval kombinálva gyógyászati készítményt alkothatnak, amelyeket be lehet adni emlősöknek, beleértve az embert is, intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan vagy szájon át. A szükséges adag a kezelendő beteg pillanatnyi állapotától, az állapot súlyosságától, a kívánt kezelés időtartamától függ. Ezek a peptidek gyógyászatilag elfogadható, nem toxikus só formájában, mint pl. savaddíciós sók vagy fémkomplexek pl. cinkkel vagy más fémmel alkotott (a bejelentésben ezeket is sóknak tekintjük) adagolhatok. A savaddíciós sókra példák a hidroklorid, hidrobromid, szulfát, foszfát, maleát, acetát, citrát, benzoát, szukcinát, malát, aszkorbát, larlarát stb. Ha az aktív alkotórészt tabletta formájában adagoljuk, a tabletta tartalmazhat valamilyen kötőanyagot, pl. tragakantot, kukorica-keményítőt vagy zselatint; valamilyen szétesést elősegítő anyagot, pl. algin-savat; és egy csúsztató anyagot, mint pl. magnézium-sztearátot. Ha folyadék formájú beadagolás kívánatos, édesítő- és/vagy illatosító anyagokat is lehet használni, az intraavénás beadagolást pedig izotóniás sóoldatban, foszfát-pufferban vagy hasonlókban lehet végrehajtani. A peptideket orvosi felügyelettel kell adagolni; a gyógyászati kompozícióknak a peptideket általában hagyományos, gyógyászatilag elfogadható hordozókkal együtt kell tartalmaznia. Az adagolás mértéke általában 20 — 2000 nanogramm peptid a beteg egy testsúly-kg-jára. A találmány szerinti eljárással előállított szintetikus peptidekben különböző változtatások lehetségesek, úgy találtuk azonban, hogy a biológiai hatékonyság szempontjából fontos, hogy az N-terminálislól számított első 28 aminosav jelen legyen, az azután következő aminosavak között lehetséges törlés vagy betoldás vagy csere. A példákban leírt eljárásokkal előállított ter-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
