198929. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kondenzált pirazolo[3,4-d] piridin-3-on származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198929 B 2 oly módon, hogy folyadék-szcintillációs számlálóban meghatározzuk a radioaktivitást, és ennek segítségével a radioaktív ligandumnak a receptorhoz való kötődését. A 3H-flunitrazepam kötődésének a gyógyszerrel kezelt állatokban való csökkenése (az egyedül a hordozóanyaggal kezelt állatokban megfigyelhető kötődéshez képest) arra mutat, hogy a vizsgálandó vegyület kötődik a benzodiazepin receptorhoz. Az anxiolitikus hatást pl. a "Cook-Davidson konfliktus" eljárás szerint határozzuk meg, hímnemű Wistar patkányok felhasználásával, amelyeket diéta segítségével normális testűlyuk 80%-ára állítunk be, de vízkorlátozást nem alkalmazzuk. Ezeket megtanítjuk arra, hogy egy kondicionáló kamrán belül — amely egy folyadék-merítőt, egy fényforrást, hangszórót is tartalmaz és burkolt padlózattal van ellátva — megnyomjanak egy emelőkart. Mind az emelő, mind a padló elektromos sokk forráshoz van kötve és a kamra egy hangszigetelt szobában helyezkedik el, amelyben a vizsgálat alatt egy fehér hangforrást aktiválunk, a külső, hallószervi ingerek elfedésére. az egyes vizsgálatokat - amelyek időtartama 47 perc — két, váltakozó séma szerint hajtjuk végre. Az első egy 5 percen át tartó, 30 másodperces, változtatható időtartamú Üzemmód, (VI), amelynek során az emelőrúd első lenyomását követően, átlagosan 30 másodperc elteltével édesített kondenzált tejet adagolunk és ennek a teljesítménynek a gyógyszer hatására bekövetkező csökkenését idegi eredetű hiányosság jelének tekintjük. A Vl-üzemmódot közvetlenül követően egyidejűleg aktiválunk egy 1000 Hz-es hangforrást és egy fény-ingert, amely egy második, rögzített arányú (FR) üzemmód kezdetét jelzi. Ez 2 percig tart, amikoris a tej-adagolás egyidejűleg történik egy elektromos láb-sokkal, a tizedik reakciót közvetlenül követve. Ezzel konfliktus-helyzetet idézünk elő. Az említett sokk intenzitása 2,00 — 3,6 mA, állatonként váltakozva. Ez arra szolgál, hogy hozzászoktassuk az állatok kb. 25 —100 reakcióhoz ezen üzemmód keretében, a teljes vizsgálat időtartama alatt. A teljesítmények az FR üzemmód keretében gyógyszer hatására fellépő növekedését az anxiolitikus hatás jelének tekintjük. Ezt a megnövekedett teljesítményt az elektromos sokkok számának növekedése alapján mérjük, amelyeket az állat hat, 2 — 3 percen át tartó FR vizsgálat során elszenvedi. A görcsoldó h lást pl. az ilyen aktivitás meghatározására szolgáló standard metrazol (pentilén-tetrazol) teszt és a maximális elektrosokk teszt segítségével állapítjuk meg, a gyógyszereknek pl. orálisan, patkányba való bevitele után. Hímnemfl Wistar patkányokat (130-175 g) 18 órán át koplaltatunk vizsgálat előtt, de vízfelvételüket korlátlanul megengedjük. A vizsgálandó vegyületet kukoricakeményítő hordozóban orális intubálás segítségével visszük be, 10 ml/testsűly-kg mennyiségben. Egy órával a-vizsgálandó vegyület bevitele után az állatoknak intravénásán (farkvégi véna) vizes oldat alakjában 24 mg/kg nictrazolt adagolunk, 2,5 ml/testsúly-kg mennyiségben. A patkényokat azonnal plexiüveg hengerekbe helyezzük és a következő 60 másodperc során legalább 5 másodpercig tartó rángógörcsök számát meghatározzuk. Az ED$o az a dózis, amely mellett az állatok fele megvédhető a meírazollal indukált rángógörcsöktől, a megfigyelési időtartam alatt. A benzodiazepin antagonizmust úgy mérjük, mint a diazepam görcsoldó hatásának ellensúlyozását, a patkány-metrazol modellben. A diazepamot (5,4 mg/kg), perorálisan és a vizsgálandó vegyületet 1 órával a metrazol adagolást megelőzően visszük be. A maximális elektrosokk eljárás esetében — amelyet patkányokban a görcsoldó aktivitás meghatározására használunk — görcsöket indukálunk, 150 mA erősségű elektromos áramnak 0,2 másodpercen át szaruhártya-elektródokon keresztül való alkalmazásával, 2 órával azt követően, hogy a vizsgálandó vegyületet az előbbi metrazol próbában leírtak szerint orálisan bevittük Az ED5ü az a dózis, amely mellett az állatok fele megvédhető az elektrosokk által indukált rángógörcsöktől az 5 másodperces megfigyelési időtartam alatt. A találmány szerinti benzodiazepin receptor modulátorok farmakológiai agonista és/vagy antagonism profilja ugyancsak meghatározható, oly módon, hogy megmérjük hatásukat patkány agy membrán készítményben a 3H-flunitrazepam kiszór ításra, gamma-aminovajsav (GABA) jelenlétében vagy távollétében, a 3H-muszcimol kötődésnek az elazolát által kiváltott fokozódására, vagy' a ^S-butil-biciklo-foszforotionát (TBPS) megkötésére. A találmány jellegzetes vegyületei közül a 4a, 3a, 7a, 7b, 8a, 8e, 9a és 12c példa termékének ICjo értéke kb. 0,9 nM, 0,35 nM, 0,5 Nm, 1,5 Nm, 3,5 nM, 1,0 nM, 0,8 nM, illetőleg 0,6 nM az in vítro benzodiazepin receptor vizsgálatban. A találmány szerinti jellegzetes vegyületek közül a 4a, 8a, 8e és 9a példa terméke az anxiolitikus hatás meghatározására vonatkozó Cook-Davidson próbában kb. 10 mg-kg (perorálisan) dózisban aktív. Az előbbieknek megfelelően a találmány szerinti vegyületek hasznosak, mint az idegrendszerre ható szerek Ü pl. benzodiazepin receptor modulátorok —, pl. idegrendszeri rendellenességek (pl. szorongás, görcsös állapotok, így epilepszia vagy más rendellenességek) kezelésében vagy rendezésében, olyan emlősök esetében, amelyek reagálnak erre a modulálásra. Ugyancsak használhatók más értékes termékek, különösen gyógyászati hatás szempontjából aktív gyógyszerkészítmények előállítására. A találmány szerinti vegyületeket — azaz az (I) általános képletű vegyületeket és sóikat vagy tautomerjeiket — előnyösen olyan eljárások segítségével állítjuk elő, amelyek önmagukban ismert kémiai reakciókat használnak fel. Ilyenek a következő eljárások: a) egy (IXa) általános képletű vegyületet — e képletben A jelentése az előbbiekben meghatározott, X jelentése reakcióképcs, éterezett vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
