198740. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminoglükozid-szteroidok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 198740 B 2 A találmány tárgya eljárás aminoglükozid-szteroidok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A találmány szerinti eljárás közelebbről az (I) általános képletű aminoglükozidok — a képletben Rj és R2 együtt kémiai kötést jelentenek, és R3 jelentése D- vagy L-sorozatba tartozó, amino-dezoxi-, amino-didezoxi- vagy amino-tridezoxi-hexopiranozil-csoport — előállítására vonatkozik. A fenti hexopiranozil-csoport például 2-amino-2-dezoxi-hexopiranozil-, 3-amino-3-dezoxi-hexopiranozil-, 3-amino-3,6-didezoxi-hexopiranozil-, 3-amino-2,3,6-trídezoxi-hexopiranozil- és 4-amino-2,4,6-tridezoxi-hexopiranoziI-csoport lehet, a D- vagy L-sorozalból. A glükozidos kötés a vagy ß lehet. A találmány szerinti eljárás az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sóinak előállítására is vonatkozik. A gyógyászatilag elfogadható só alatt olyan sókat értünk, amelyek rendelkeznek a szabad bázis biológiai hatásával és tulajdonságaival, és biológiai és egyéb szempontból megfelelőek. A fenti sókat szervetlen savakkal, például hidrogén-kloriddal, hidrogén-bromiddal, kénsavval, salétromsavval vagy foszforsavval; vagy szerves savakkal, például ecctsawal, propionsawal, glikolsawal, piroszőlősawal, oxálsawal, almasawal, malonsawal, borostyánkősavval, maleinsawal, fumársawal, borkősavval, citromsavval, benzoesawal, fahéjsavval, mandulasavval, metánszulfonsawal, etánszulfonsawal, p-toluolszulfonsawal vagy szalicilsavval képezhetjük. Az (1) általános képletű aminoglükozid-szteroidokat a találmány értelmében úgy állíthatjuk elő, hogy egy (II) képletű szteroidot egy D- vagy L-sorozatba tartozó védett, amino-dezoxi-, amino-didezoxi- vagy amino-tridezoxi-hexopiranóz 1-halogén-származékával kondenzálunk, a kapott vcgyületből a védőcsoportot eltávolítjuk, majd ciklizálással laktonná alakítjuk. A védőcsoport eltávolítását előnyösen bázissal végezzük. A kondenzálást célszerűen megfelelő szerves oldószerben, ezüstkatalizátor jelenlétében játszatjuk le. Különösen előnyös katalizátorként az ezüst-trifluor-metánszulfonát használata, előnyösen a 4.112.076. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett körülmények között. A védőcsoport eltávolítására használt bázis például nátrium-, kálium- vagy bárium-hidroxid vagy -metoxid vagy trietil-amin lehet. A reakciót szobahőmérsékleten játszathatjuk le, a reakcióidő néhány óra és néhány nap között változhat. A fenti vegyületeket ciklizálással olyan (I) általános képletű vegyületekké alakítjuk, amelyek képletében Rj és R2 kémiai kötést képez, íaktongyűrű kialakításával. A ciklizálást sósavban végezhetjük, pH 1 és 2 közötti értéken, szobahőmérsékleten, például 3- — 5 órán keresztül. A kiindulási vegyületként használt (II) képletű szteroid és amino-dezoxi-, amino-didezoxi- és amino-tridezoxi-hexopiranózok ismert vegyületek, vagy ismert módszerekkel előállíthatók. Az (I) általános képletű aminoglükozid-szteroidok és gyógyászatilag elfogadható sóik specifikusan gátolják az ouabain (G-strofantin) kötődést anélkül, hogy a (Na+ — K + )-ATP-áz aktivitást gátolnák, fenti hatásuk következtében gyógyászati készítmények hatóanyagaként használhatók, magas vérnyomás kezelésére. (I) általános képletű aminoglükozid-szteroidok ouabaint helyettesítő képességének vizsgálata a specifikus ouabain-kötő (Na—-K—)-ATP-áz receptorokon, a (Na— — K—j-ATP-áz enzimaktivitás gátlása nélkül, in vitro a) Radiokémiái vizsgálat A (Na + — K+ )-ATP-ázban feldúsult mikroszoma-frakciót kutyavese külső velőjéből állítjuk elő, Jorgensen [Biochem. Biophys. Acta 356, 36- — 52 (1974)) módszere szerint. A 0,5 /ig proteint tartalmazó, részlegesen tisztított enzimet 110 /il, 3 mmól/1 MgCl2-ot, 3 mmól/1 EGTA-t, 80 mmól/1 Hepes-puffert (pH 7,4) és 2 mmól/1 Y2 —P32 —ATP-t tartalmazó eíegyben 37 °C-on 15 percen keresztül inkubáljuk, növekvő koncentrációban összehasonlító vegyületként ouabain vagy aminoglükozid-szteroidok jelenlétében. A reakciót 10%-os végkoncentrációban 0,1 mól/1 koncentrációjú hideg perklórsav hozzáadásával leállítjuk, és hozzáadunk 0,5 ml 20 vegyész-ős aktívszén-szuszpenziót. A szuszpenziót centrifugáljuk és a felülúszóban lévő 32P mennyiségét folyadékszcintillációs számlálóval mérjük (Mall F. és munkatársai: Biochem. Pharm. 33(1), 46-53(1984)]. A különböző koncentrációban jelenlévő aminoglükozid-szteroidok és az ouabain hatását a teljes (Na + — K + )-ATP-áz %-os gátlásában fejezzük ki, és kiszámítjuk az IC50 értékeket. Az (I) általános képletű vegyületek a fenti vizsgálatban inaktívaknak bizonyultak. b) (-H)-oabain kiszorítása emberi vörösvértestekből A vizsgálatot Erdmann E. és munkatársai (Arzneim. Forsch. 34(11), No. 10, 1310 (1984)] módszere szerint végezzük. Közelítőleg 1 — l,8xl09/ml mosott eritrocitát 130 mmól/1 NaCl-ot, 1 mmól/1 MgCl2-ot, 10 mmól/1 glükózt, 10 mmól/1 szacharózt, 10 mmól/1 Tris/HCl-puffert (pH 7,4), 2xl0'9 mól/1 3H-oabaint és növekvő koncentrációban jelzetlen aminoglüközid-szteroidokat tartalmazó eíegyben 37 °C-on 5 órán keresztül inkubálunk. A kötött ouabain mennyiségét gyors szűréses módszerrel (Whatman GF/C üvegszűrő membránon) határozzuk meg, amellyel elválasztjuk a szabad ouabaint a membránhoz kötöttől. A szűrőn maradt radioaktivitást folyadékszcintillációs számlálóval határozzuk meg. A 10"3 mól/1 jelzetlen ouabain jelenlétében mért kötődést tekintjük nemspecifikus kötődésnek. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
