198740. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminoglükozid-szteroidok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 198740 B 2 A disszociációs állandót (Kp értéket) a jelzetlen aminoglükozid-szteroidok azon koncentrációjából számítjuk ki, amely 50%-kal gátolja a *H-oabain kötődést egyensúlyi helyzetben, Erdmann és munkatársai [Schmiedeberg^s Arch. Pharmacol. 283, 335 (1973)] módszere szerint. Az (I) általános képletű vegyületek a fenti vizsgálatban hatásosak, Kq értékük 10’9 és 10'6 közötti. c) (Na— — K—VATP-áz által médiáit Na±-kiáramlás gátlása emberi vörösvértestekben A vizsgálatot Garay és munkatársai [Biochem. Pharmacol. 33, 2013 — 2020 (1984)0] módszere szerint végezzük. A vörösvértesteket 20-25%-os hematokritértékben 74 mmól/1 MgCl2-ot, 2 mmól/1 KCl-ot, 84 mmól/1 szacharózt, 10 mmól/1 MOPS/Tríspuffert (pH 7,4 37°C-on) és 10 mmól/1 glukózt tartalmazó elegyben szuszpendáljuk. A vörösvértest-szuszpenziót hidegen Mg2 + - -szacharóz-K+ közeget és növekvő koncentrációban ouabaint, és állandó koncentrációban aminoglükozid-szterodiot tartalmazó elegyben szuszpendáljuk. A vörösvértest-szuszpenziót hidegen Mg2+szacharóz-K + közeget és növekvő koncentrációban ouabaint, és állandó koncentrációban aminoglükozid-szteroidot tartalmazó csövekbe mérjük. A csöveket 37 °C-on inkubáljuk, és különböző időpontokban (0., 10., 20., 30. percben) alikvotokat veszünk a szuszpenzióból és hidegen centrifugáljuk. A felülúszóban atomabszorpciós módszerrel mérjük a külső Na+-koncentrációt. Elvégezzük az ouabain-függő Na+-kiáramlás gátlásának kinetikai analízisét a különböző aminoglükozid-szteroid-koncentrációk függvényében, és minden egyes vegyület esetén kiszámítjuk az IC<o-értéket. A fenti vizsgálat szerint az (I) általános képletű vegyületek 10'9 és 10"6 mól/1 közötti koncentráció-tartományban hatásosak. (I) általános képletű aminoglükozid-szteroidok vérnyomáscsökkentő hatásának vizsgálata in vivo A szisztolés vérnyomás indirekt meghatározását csoportonként négy spontán hipertenzív, 8- — 10 hetes patkányon (SHR, Kyoto, szállítja: Charles River, Olaszország) végezzük. Az állatokat 36 “C-os környezetben tartjuk 10- —15 percen keresztül és feljegyezzük a pulzus-nyomást, majd mérjük a szisztolés vérnyomást és a szívverést, közvetett farok-mandzsetta-módszerrel, W+W BP rekordert (Model 8005) alkalmazva. A vizsgálandó vegyületeket orálisan adagoljuk 5%-os gumiarábikum-oldatban szusz-Kndálva, naponta egy alkalommal, négy egymást vető napon keresztül, és a méréseket a kezelés előtt, és a kezelés után 1, illetve 5 órával végezzük, a kezelés első és negyedik napján. A kontroll állatok csak hordozóanyagot kapnak (0,2 ml/100 g testtömeg). A vizsgálandó vegyület hatását a szisztolés vérnyomásra a kezelés előtti és utáni értékek különbségéből számítjuk ki. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények szilárd készítmények — például tabletták, kapszulák és porok — vagy cseppfolyós készítmények — például elixírek, szirupok és szuszpenziók — lehetnek, orális alkalmazás esetén. Az (I) általános képletű hatóanyagokból injekciókat vagy kúpokat is készíthetünk. A hordozóanyag vagy hígítóanyag a találmány szerint előállított készítményekben például porszerű szilárd anyag, például laktóz, szacharóz, dextróz, mannit, szorbit, cellulóz és glicin, vagy egyéb hasonló anyag lehet. A készítmények ezenkívül tartalmazhatnak csúsztatóanyagot, kötőanyagot vagy dezintegráiószert is. Csúsztatóanyagként például szilíciumdioxidot, talkumot, magnézium-sztearátot és polietilénglikolt használhatunk. A kötőanyag például keményítő, tragantgyanta, zselatin, metilcellulóz és polí(vinil-pirrolidon) lehet. Dezintegrálószerként megfelel például a keményítő és az agar stb. A találmányt közelebbről — a korlátozás szándéka nélkül az alábbi példák segítségével kívánjuk ismertetni. 1. példa 3-f(3-Amino-dezoxi-ff-D-glükopiranozil)-oxil-14.21-epoxi-21-hidroxi-(3/t.5/?.14g.20S.- 21R)-24-nor-kolánsav előállítása 374 mg 3-21-hidroxi-14,21-epoxi-(3/?,5/?,14/J,- 20S,21R)-24-nor-kolánsav-laktont 80 ml metilén-kloridban oldunk és az oldathoz 0 #C-on, keverés közben, 4 g 4 A molekulaszűrő jelenlétében 928 mg 3-dezoxi-2,4,6-tri(0-acetil)-3-(trifluor-ace tamido)-a -D-glükopiranozil-bromid 20 ml metilén-kloriddal készült oldatát, és 514 mg ezüst-trifluor-metánszulfonát 20 ml dietil-éterrel készült oldatát csepegtetjük. Az elegyet 30 percen keresztül 0°C-on keverjük, majd szüljük, a szűrletet telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és szárazra pároljuk. A nyers maradékot szilikagélen kromatografáljuk, az eluálást toluol és etilacetát 4:1 térfogatarányú elegyével végezzük. 455 mg 3-{[3-dezoxi-2,4,6-tri(0-acetil)-3-(trifluor-acetamido)-a-D-glükopiraznozil]-oxi}-14,21- -epoxi-21-hidroxi-(3/?,5/?,14/9,20S,21R)-24-nor-kolánsav-laktont kapunk, a hozam 60%. A fent kapott védett glükozid 455 mg-ját 60 ml 99:1 térfogatarányú metanol-víz eleggyel készült 0,05 n kálium-hidroxid-oldatban oldjuk. Az oldatot 72 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk, majd szárazra pároljuk. A maradékot vízben oldjuk és a kapott oldat pH-ját ecetsavval 5-re állítjuk. A kivált csapadékot leszűrjük, desztillált vízzel mossuk és szárítjuk. 232 mg cím szerinti vegyületet kapunk, a hozam 80%. 5 10 15 20 25 30 35 4C 45 5C 55 60 65 3
