198627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás granulocita telepstimuláló faktort tartalmazó stabil gyógyászati készítmény előállítására
3 HU 198627 B 4 készítményekben. Előnyös humán G-CSF-ek azok, amelyeket valamilyen humán G-CSF termelő törzs tenyészetének felühiszójáhól izolálnak és az olyan polipeplidek vagy glikoproleinek, amelyek humán G-CSF aktivitással bírnak, és amelyeket olyan rekombináns vektorral transzformált gazdaszervezetből kapunk, amely vektor a humán G-CSF aktivitással bíró polipeptidet kódoló gént tartalmazza. Két különösen előnyös G-CSF-re mutatunk be példát az alábbiakban. (1) Humán G-CSF, amely a kővetkező fizikokémiai jellemzőkkel bír: i.) molekulatömeg: mintegy 19 000 ilOOO, nátrium-dodecil-szulfét-poliakrilamid gél elektroforézlssel mérve: 10 15 20 25 ii. ) izoelektromos pont: az alábbi három izoelektromos pont közül legalább eggyel rendelkezik: pl = 5,5 ± 0,1, pl = 5,8 ± 0,1, és pl = 6,1 ± 0,1; iii. ) ultraibolya adszorpció: maximuma van 280 nm-nél és minimuma van 250 nm-nél; iv. ) A 21 gyökből álló aminosavszekvencia az N-terminálistól kiindulva az alábbi: HzN-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-I,eu-Pro-Glri-Sei— Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-Gln-Val(2) Humán G-CSF, amely vagy egy humán granulocita stimuláló faktor aktivitással rendelkező polipeptidet tartalmaz, amely polipeptid az alább bemutatott aminosavszekvenciának egészével vagy részével jellemezhető, vagy egy olyan glikoproteint tartalmaz, amely az előbb említett polipeptíd-szerkezet- Lel és egy cukorláncrésszel rendelkezik: (Mfit)n Thr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gin Val Arg Lys Ile Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin Glu Lys Leu (Val Ser Glu). Cys Ala Thr Tyr Lys heu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gin Leu His Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Ile Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr Ile Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Alá Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro — (azzal a feltétellel, hogy m jelentése 0 vagy végzett tovább tisztítás és koncent 1; és n jelentése 0 vagy 1). után. Egy másik megoldás szerint az ol A G-CSF említett két típusénak előállítására 50 pl. fagyasztva szárítással végzett dehid szolgáló eljárások részleteivel kapcsolatban lásd a 153 273/1984, 269 455/1985, 269 456/ /1985, 270 838/1985 és 270 839/1985 számú japán szabadalmi bejelentéseket, amelyek mindegyikét a jelen találmány bejelentője nyújtotta be. Egy másik módszer, amelyet alkalmazhatunk, G-CSF termelő sejtek fúziójának megvalósításából éli ön-burjánzó rosszindulatú tumor sejtekkel, és az így létrejövő hibridóma tenyésztéséből mitogén jelenlétében vagy anélkül. A kapott humán G-CSF-et tartalmazó oldatot fagyasztott állapotban lehet tárolni, szükség esetén bármilyen ismert technikával 00 05 után tárolhatjuk. Az így készített humán G-CSF-ek mindegyikét fel lehet dolgozni a jelen találmány szerinti leírás alapján abból a célból, hogy stabil, G-CSF-et tartalmazó gyógyászati készítményt kapjunk. A tipikus felületaktív anyagok, amelyeket használhatunk a jelen találmány szerinti stabil, G-CSF-et tartalmazó gyógyászati készítmény kialakításéhoz, például a következők: nemionos felületaktív anyagok 6-18 HLB-vel, mint pl. szorbitán alifás karbonsav-észterei (pl. szorbitán monokaprilát, szorbitán monolaurát és szorbitán monopalmitát), glicerin alifás karbonsav észterei (pl. glicerin 4
