198491. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karbapenem antibiotikumok előállítására
1 HU 19849Í B 2 BCH-1 a (XXII) képletei vegyület. Vegyület BCH-1 C max. Fél élet-T max. AUC (10 mg/kg) (mikrotartam (perc) (mikrogramm/ml) (perc) gramm óra) (perc) (ml) 1. példa-15,4 9 10 6,8 + 16,1 10 20 10,9 Vegyület BCH-1 Vérbeni koicentrácíó (mikrogramm/ml) i.p. 20 mg/kg i.p. adagolás után eltelt idő (perc) 1. példa 10 20 30 45 60 90-15,4 11,4 . 7,2 2,9 0,7 0,3 + 15,4 16,1 12,6 7,4 3,0 0,3 Vizeletbeni kiválasztás előzetesen éjszakán át éheztettiik majd egy órával a hatóanyag beadagolása előtt és hat órán keresztül, a vizelet gyűjtése során ad libitum dextróz-aminosav oldatot adtunk nekik. A vizeletmintákat B. subtilis ATCC 6635 törzset tartalmazó érzékeny próbalemezek alkalmazásával vizsgáltuk a biológiai aktivitás szempontjából. Vegyület BCH-1 Visszanyert százalék 10 mg/kg 0-3 óra 3-6 óra 0-6 óra 1. példa 44 0,2 44,2 + 67 0,1 67,1 In vivo aktivitás Fertőző preparátum: 9,0 ml BH3 táptalajt inokulálunk kacsnyi mennyiségű felolvasztott tárolt P. aeruginosa A 9843a szuszpenzióval, és 18 óráig 37 ”C-on inkubáljuk. A 18 órás tenyészet 0,5 ml-ét 20 ml BHI táptalajhoz adjuk, és 3 óráig állandó rázás közben inkubáljuk 37 ‘C-on. A rázott kultúra 1/10,000 hígítását készítjük el 0,4 %-os sertés emésztő mucinban. Az egeret intraperitoneálisan 0,5 ml baktériumtenyészettel fertőzzük (amely megfelel 6,0 x 104 életképes sejtnek / egerenként). Az 50 %-os védelmi dózis/PDso meghatározása: A fertőzött egeret intramuszkulárisan különböző dózisú I. példában előállított vegyülettel kezeljük közvetlenül a fertőzés és 2 órával a fertőzés után. Minden egérnek 0,2 ml anyagot adagolunk intramuszkulárisan. A fertőzés után öt napon keresztül regisztráljuk az elhullásokat és meghatározzuk a vegyület PD50 értékét az 50 %-os végpont segítségével probit analízis görbét alkalmazva. A PD5O im. érték 0,71 mg/kg. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. 1 1. példa (5R, 6S)-6-(lR-hidroxi-etil)-7-oxo-3-(I-metiI-4-tiatetrahidro -tiopiranium)- l-azabiciklo(3.2.0.)hept-2-én-2-karboxilát (XXIII) képletű vegyület. a) 4- Merkapto-1- metil- tetrahidro- tiopiraniun-triflát 500 mg (1,47 mmól) (24) képletű 4-(acetil-tio) -1 -metil-tetrahidro-tiopiranium-triflát 1,1 g (6,25 25 mmól) 4-acetiltio-tetrahidro-tiopiránt 1,1 ml metiltrifláttal diklórmetánban 0 ‘C-on kvaternerezünk. A megfelelő kvaternerezett származékot kapjuk (2,16 g, 6,34 mmól, 98,6 %) 4 ml vizes oldatát hideg (jeges) fürdőben 2 ml (2 mmól) 1 m nátriumhidroxid 30 oldattal reagáltatjuk. Az elegyet kb. 1 óráig keverjük. Ezűatt vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint (reveiz fázis szilikagél) a kiindulási anyag eltűnik. Az eresen bázikus oldat pH értékét 10 % sósav segítségével 7,5 értékre állítjuk be. A tiolt a következő 35 kapcsolási rekacióban az enol-foszfáttal ebben az állt pótban reagáltatjuk. j) (p-nitro-benzil)-(5R, 6S)-6-(lR-hidroxi-etil)-7- oxc-3-(l-metil-4-tia-tetrabidro-tiopiranium-difenil-fo szfát)-l-azabiciklo (3.2.0) hept-2-én-2-karboxilát 40 74 mg (0,5000 mmól (26) képletű (p-nitro-benzil)-6-(lR-hirdoxi-etil)-3,7-dioxo-l-azabiciklo(3.2.0) hep:-2-én-3-karboxilátból készült enol-foszfát, 105 mikroliter (0,603 mmól) diizopropil-etil-amin és 124 mikroliter (0,598 mmól) difenil-klór-foszfát 4 ml 45 acetonitrilben készült oldatát 0‘C-on 1 óráig hideg (50(i mg megfelelő 4-acetil-tio-származékból készült) (27) képletű 4-merkapto-l-metil-tetrahidro-tiopiranium-:rifláttal reagáltatjuk. Annyi (körülbelül 20 ml) acetonitrilt adunk az elegyhez, hogy fáziskeveréket 50 kapjunk. Az oldatot 2 óráig 0 ‘C-on keverjük, 18 óráig -78 °C-on állni hagyjuk, majd 0 ‘C-on 4 óráig keverjük. A pH értékét vizes nátriumhidrogénkarbonát hozzáadással 7,8 értéken tartjuk. Az acetonitrilt 15 ‘C alatti hőmérsékleten elpárologtatjuk, és vizes ol- 55 datot valamint egy gumiszerű csapadékot kapunk. A vizes frakciót reverz fázisú szilikagél oszlopra (2,5 x 8 cm belső) visszük. Az eluens polaritását acetonitril hozz (adással növeljük. A kapott gumiszerű csapadékot 10 % acetonitril/víz elegyben oldjuk és ugyancsak 60 az oszlopra visszük. A kívánt vegyületet 15 % - 30 % aeetonitril-víz eluenssel eluáljuk. Az acetonitrilt nagyvákuumban 1 óráig körülbelül 0-5 ”C-on elpárologtatjuk. A vizes fázis liofilizálásával sárga port kapunk (240 mg, 67 %) 65 IR (Nujol) Vmax: 1722(erős, béta-laktám C=0) és 7
