198128. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyszerkészítmények előlllításár, liposzómákat tartalmazó vizes diszperzió vagy száraz készítmény alakjában
ü • 198 128 10 Glu-Thr-llc-Giu-Asp-Met-Asn-Val-Lys-Phe-Phe-Asn- Ser-Asn-Lys-Lys-Lys-Arg-Asp-Asp Phe-Glu-Lys Lru- Thr-Asn-Tyr-Ser-Val-Tlu-Asp-Lcn-Asn-Val-ClnArg- Lys-A!a-Ile-íIís-Giu-Leu-Ile-G!n-Val-Met-Á!a-Giu-Leu- Ser-Pro-Ala-Ala-Lys-Thr-Glu-Lys-Arg-Lys-Ärg-Ser-Gln- Met-Leu-Phe-Gln-Gly-Arg-Arg-Ala-Ser-Gln-OIi, valamint a 2,107,718 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás szerinti rekombinált humán gamma-interferon, melynek aminosav-szckvenciúja u következő: HjN-Cys-Tyr-Cys-Gln-Asp-Pro-Tyr-Val-Lys-Glu- Ala- Glu -Asn -Leu-Ly s - Ly s -T yr-Plie - Asn - AJa - Gly- His- Ser -Asp -Val-Ala - Asp -Asn-Gly-Thr -Leu-Phe -Leu-Glyíle-Leu-Lys-Asn-Trp-Ly'-Glu-Glu-Ser-Asp-Arg-Lys-lle- Met-Gln-Ser-Gln-Ile-Val-Ser-Phe-Tyr-Phe-Lys-Leu-Phe- Lys-Asn-Phe-Lys-Asp-Asp-Gln-Ser-lle-G!n-Lys-Ser-Val- Glu-Thr-Ile-Lys-Glu-Asp-Met-Asn-Val-Lys-Phe-Phe- Asn-Ser-Asn-Lys-Lys-Lys-Arg-Asp -Asp-Phe-Glu Lys- Leu-Thr-Asn-Tyr-Ser-Val-Thr-Asp-Leu-Asn-Val-Gln- Arg -Lys-Ala -Ile - His - Glu-Leu-lle-Gln-Val-Met-Ala-Glu- Leu-Ser-Pro-Ala-Ala-Lys-Thr-Gly-Lys-Arg-Lys-Arg-Ser- Gln-Met-Leu-Phe-Arg-Gly-Arg-Arg-A!a-Ser-IÍ!n-OH. A ümfokinek csoportjába tartozik ezenfelül a tisztított formában levő humán interleukin 2, például humán, neoplazmás leukémia- vagy limfóma-sejtek T-sejtmitogénnel való aktiválása után a tenyészet szűrletében megtalálható és fordított fázisú nagynyomású folyadék-kromatográfiával (HPLC) tisztított interleukin 2; lépből vagy perifériás vérből származó emberi T-limfociták kultúrájából antigénekkel «agy mutagénekkeí, mint például humán T-sejt-leukémialimfóma-virusokkal (HTLV--I), fitohemagglutininnal vagy konkanavalin A-val való stimuiálás után kinyerhető tenyészet szűrletek, melyek makrofágmigrációgátló faktor (MÍF), leukocita-migrációgátló faktor, leukocita-migrációfokozó faktor, makrofágaktiváló faktor (MAF), koloniastimuláló faktor, interleuk.in. 1 és 2. valamint gamma-interferop fogalmak alatt ismertté vált komponenseket tartalmaznak, különösen makrofág-aktiváló faktort (MAF) nagymennyiségben tartalmazó ilyen tcnyészetszíírletek és izolátumok. A találmány szerinti gyógyszerkészítmények kitűnnek viszonylag egyöntetű részecskeméretükkel (körülbelül 2,0—3,0 - 1Ó~9 m) és nagyfokú tárolási stabilitásukkal. így a fenti szintetikus foszfoiipidekből és muramil-peptidekből álló száraz készítmények (liofilizátumok) több hónaptól több évig eltarthatok. A szárított készítmények röviddel a használat előtt egyszerű módon vizes pufferoldatban rázással (Vortex) vagy vibrálással diszpeigálhatók és in situ alkalmazhatók, és a legtöbb esetben elkerülhetők a további műveletek, mint szűrés, semlegesítés, dialízis és hasonlók. Szintetikus foszfoiipidekből a zárványvegyületként muramil-peptidekbői álló vizes liposzómadiszperziók 10 °C alatti hőmérsékleten néhány héttől néhány hónap'g eltarthatok, sőt liofilizátum formájában stabilan tárolhatókká tehetők. A találmány szerinti eljárással előállítható száraz készítmények, illetőleg az azokból előállítható liposzóma-diszperziók tíz 1,523,965 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetett liposzóma diszperziókkal szemben a következő előnyökkel rendelkeznek: A találmány szerint előállítható liposzóma-diszperzió tartalmaz: — egy szerin komponenst, kizárólag telítetlen acil-csoportokkal, — egy speciális ieeitin komponenst, amely mind egy telített, mind egy telítetlen acil-csoportot tartalmaz. A következő kísérleti jelentésben megfelelő toxikológia! adatok segítségévei kimutatjuk, hogy egy találmány szerinti liposzóma-diszperzió — amely egy telítetlen acil-csoportokkal rendelkező szerin komponenst és egy telített és egy' telítetlen acilcsoportot hordozó lecitin komponenst tartalmaz — meglepő módon előnyösebb, mint egy olyan liposzóma-diszperzió, amelynek szerin komponense és lecitin komponense kizárólag telített acil-csoportokat tartalmaz. Ezenkívül a találmány szerint előállítható liposzóma-diszperzió váratlan módon felülmúlja egy olyan liposzóma-diszperzió hatását, amelynek szerin komponense csak telítetlen acil-csoportokat és lecitin komponense csak telített acil-csoportokat tartalmaz. Kísérleti eredmények a) A kísérlet elvégzése Multüamelláris üposzómák stabilitását ellenőrizzük, amelyek szintetikus lipid alkotórészként (I) nátrium-1,2-di (9-cisz-oktadecenoií)-3-snfoszfatidü-S-szerint, (II) l-n-hexadekanoil-2-(9-cisz-oktadecenoil)-3-snfoszfatidil-kolint és zárványvegy(Hétként N-nceül-D-muramii-L-alanil-D- izoglutaminil-L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-3-sn-g!icero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etil-amidot tartalmaznak, a szuszpenzio előállításakor és egy év elteltével, különböző hőmérsékleten tárolt vizes liposzóma-szuszpen ziók vizsgálatával. Á lipidkomponensek mennyiségét nagynyomású folyadék-kromatográfiávai határozzuk meg. A szuszpenzió megjelenése: homogén, fehér, lát írató részecskéktől mentes; mikroszkópos kép: muItilameHáris liposzómák mutathatók ki. A zárvány volumene: 2,31 1/mói; a szuszpenzió volumene (V): 2,5 ml. Az ampulla (= 15 ml) a tanúsítvány szerint 75 mg (I) képietű lipid alkotórészt és 175 mg (II) képletű lipid alkotórészt tartalmaz. Követelmény: minden egyes lipidkomponens esetében a deklarált mennyiség 95,0— 125 %-a legyen jelen a szuszpenzióban, Oszlop: rozsdamentes acél, 10 cm hosszú, 4,8 mm belső átmérőjű; a töltet NucleosiI-5 C18 vagy ezzel egyenértékű oszlop. Kimutatás: UV, 214 nm. vtozgó fázis: 10”2 mól tctramotil-ammőnlum-fluorid + 5X10“3 mól trikaprliil-mctil ammónium-klorid, metanol-víz (98+ 15). áthaladás: 1 ml/perc, nyomás kb. 60 bar. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
