198128. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyszerkészítmények előlllításár, liposzómákat tartalmazó vizes diszperzió vagy száraz készítmény alakjában
19 198 128 20 E szárított készítményhez (liofilizáíum) használat előtt szobahőmérsékleten 2,5 ml-es steril fecskendővel kalcium-mentes, foszfátpufferrel pH 7,2—7,4-re beállított konyhasóoldatot (Dulbeccoj adunk és a fiolát standardizált laboratóriumi rázógépen (Vortex, 6. fokozat) 10 percig rázzuk- A képződött liposzómadiszperzió 4 C-on tárolható éa párén terálisan. (iv.) alkalmazható. 2. példa Gömblombikban feloldunk 586 mg steril-íercbuíanolt, 0,1 mg N-acetil-D-muramií-L-aJanil-D-izoglutaminilL-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etil-amidot (előállítás a 25 495 számú európai szabadalmi leírás szerint), 75 mg (95 % tisztaságú) nátrium-! ,2-dl(9-cisz-oktade.cenoil)-3-snfoszfatidil-(S)-szerint {előállítás Browning J. és Seelig J. szerint, Chem. and Physics of Lipids 24, 103—118 (1979)] és 175 mg (95% tisztaságú) l-n-hexadekanoil-2-(9-c/sz-oktadckanoii)-3-.i»-fos/,fatidil-kolmt (Avanti, Polar Lipids). Az oldatot „Acrodisc”-en (2,0 10~7 m) sterilre szűrjük és steril fiolába töltjük. A fiolát 150 ford/min sebességgel rázzuk és az oldószert tiszta, 105 Pa nyomáson átszűrt nitrogéngázza! kifúvatjuk. Végül a fiolát nagy vákuumban 6,0 Pa nyomáson légtelenítjük. A fiolát argon-védőgáz alatt lezárjuk. Használat előtt az előállított filmhez steril fecskendővel 2,5 ml steril, kalcium-mentes, foszfátpuffcrre! pH 7,2-7,4-re beállított konyhasóoldatot (Dulbecco) adunk és a fiolát standardizált laboratóriumi keverőn (Vortex, 6- fokozat) 10 percig rázzuk. A képződött liposzóma-diszperzió 4 °C-on tárolható és parenterálisan (iv.) alkalmazható. 3. példa A 2. példához hasonlóan 75 mg (0,091 millimól) nátrium-1,2-di(9-cisz-oktadecenoi!)-3-sn-foszfatidilszerinből, 175 mg (0,231 millimól) l-u-hexadckanoil-2-(9-cisz-oktadecenoil)-3-sn-foszfatidil-kolinból és 0,1—10 mg N-acetil D-muramil-L-alanil-D-izogiutaminil - L- aianin-2-(1,2 - d ipalmitoii - sn-glicero-3-hidroxi - foszforil-oxi)-etil-amidbó! álló liposzómák vizes diszperziói áilithatók elő. 4 4. példa Gömblombikban feloldunk 586 mg steril íerc-butanolt, 75 mg (95% tisztaságú) nátrium-1,2-di(9-cAzoktadecenoil)-3-s/í-foszfatidil-(S)-szeiint és 175 mg (95% tisztaságú) l-«hexadekanoil-2-(9-cisz-oktadecenoil)-3-füszfatidil-koiiní, „Acrodisc”-en sterilre szűrjük (2,0 10~7 m) és steril fiolába töltjük. A fiolát 1750 ford/min sebességgel rázzuk és az oldószert tisztított, 10s Pa nyomáson szűrt nitrogéngázzal kifúvatjuk. Végül a fiolát 0,6 Pa nagyvákuumban légtelenítjük. A fiolát argonvédőgdz-almoszférában lezárjuk. Használat előtt az előállított filmhez szobahőmérsékleten, steril fecskendővel 4 g/i koncentrációjú Doxorubicint tartalmazó 2,5 ml steril, kalcium-mentes, foszfátpufferrel pH 7,2-7,4-re beállított konyhasóoldatot (Dulbcco) adunk és a fiolát standardizált laboratóriumi rázógépen (Vortex, 6. fokozat) 10 percig rázzuk. Utána a diszperziót 40 000 g gyorsulással 60 percig centrifugáljuk. A szűiletet elválasztjuk és a liposzómákat 2,5 ml 0,85%-os steril konyhasóoldatban szuszpendáijuk. 5. példa Fiolában (15 ml) feloldunk 506 mg steril férc-butanőit, 75 mg (98% tisztaságú) nátrium-ls2-di(9-c/szoktadecenoil)-3-s?j-foszfatidil-(S)- szerint [előállítás Browning L és Seelig J. szerint, Chem. and Physics of Lipids 24, 103 (1979)] és 175 mg (99,5% tisztaságú) i-u-hcxadekanoil -2-(9--mz-oktadeeenoil) 3-s«-foszfatidil-koliní [előállítás EibI H. szerint, Chem. Physics of Lipids 26, 239 (1980) és Eibl H. szerint (Angew. Chemie 96, 247 (1984)]. Az oldatot „Acrodisc”-en (2,0 • !0~7 m) sterilen szűrjük és steril fiolába töltve —45 °C-on fagyasztjuk. 25 °C elérésekor a fiolát vákuumban kiszárítjuk és argongáz-atmoszférában lezárjuk. Használat előtt a fenti szárított készítményhez steril fecskendővel 4 g/1 koncentrációjú Doxorubicint tartalmazó 2,5 in! sterih kalcium-mentes, foszfátpufferrcl semlegesre beállított konyhasóoldatot (Dulbecco) adunk és a fiolát standardizált laboratóriumi rázógépen (Vortex, 6. fokozat) 1 percen át rázzuk. 22,5 rni steril, kalciummentes, foszfát-pufíerezett, 10 °C-on kiegyensúlyozódott konyhasóddá! hozzáadása után a szuszpenziót 2 percig rázzuk, majd 10 000 g gyorsulással 10 °C-on 30 percig centrifugáljuk. A maradékot elválasztjuk és a liposzómákat 25 ml steril konyasóoldatban 10 cC-on újraszuszpendáljuk. A liposzómákat 2,5 ml 0,85 %-os steril konyhasóoldatban szuszpendáijuk a centrifugáiás megismétlése után. A liposzóma-szuszpenzió 9 mg Doxorubicin! tartalmaz 250 mg lipidkomponehsre és intravénás adagolásra alkalmas. 6. példa Az 5. példa szerint Doxorubicint tartalmazó liposzómákat állítunk elő 225 mg (0,297 millimól) (99,5% tisztaságú) l-/i-hexadekanoil-2-(9-dsz-oktad e ce n o il)- 3 -sí; -fo sz fa ti di I ■ ko! int és 25 mg (0,030 millimól) (98% tisztaságú) nátrium-l,2-di(9-cisz-oktadecenoil)-3-síi-foszfatidil-S-szerint tartalmazó szárított készítményből. A liposzóma-szuszpenzió 7 mg Doxorubicint tartalmaz 250 mg iipidkomponensre és iv. adagolásra alkalmas. ’ 7. példa A 4. és 5. példa szerint liposzóma-díszperziót állítunk elő, foszfolipídek szárított készítményét 1 g/1 Mitomycin C-t tartalmazó 2,5 ml steril, kalciummentes foszfátpufferrel pH 7,2-7,4-re beállított konyha5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
