198090. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L 17046 antibiotikum előállítására

így 3,8 g nyers termékei kapunk, amelyet a 4. példában leírt módon tisztítunk. A tisztítási eljárás után

1,25 g és 0,53 g tömegű két frakciót kapunk (oszlopkroniatográfia), amely lényegében tiszta L17046 antibiotikumot tartalmaz.

13

6. példa

4.5 g teikoplanin komplexet, amely 10 tömeg% vizet tartalmaz, 250 ml acetonban szuszpendálunk és csepegtetve, kevertetés közben 15—20°C-on 10 ml 96%-os (tömeg/tömeg) kénsavat adunk az oldathoz. Kb. 30 perc elteltével tiszta oldat keletkezik. Az elegyet egy éjjelen át szobahőmérsékleten kevertetjük, majd 800 ml dietilétert adagolunk, a szilárd csapadékot szűrőn összegyűjtjük, dietiléterrcl mossuk és vákuumban (1,665 X102 Pa) szobahőmérsékleten szárítjuk. így 3,68 g nyers terméket kapunk. Ezt a nyers tennéket a 4. példa befejező részében leírtak szerint szilanizált szilikagél oszlopon, kromatográfiával tisztítjuk.

Kitermelés: 1,18 g lényegében tiszta L 17046 antibiotikum.

7. példa

8.5 g teikoplanin A2 faktort, amely 10 tömeg % vizet tartalmaz, 200 ml, száraz sósavval telített 1,2-dimetoxi-etánban szuszpendálunk. A reakcióelegyet 25—30 °C-on kevertetjük, 2,5 órán át, miközben száraz sósavat buborékoltatunk út. A sósav-átbuborékoltatást abbahagyjuk és a keveréket 12 órán át 25 °C-on hagyjuk állni. 600 ml dietilétert adunk hozzá, és a szilárd csapadékot szűrőn összegyűjtjük, 200 ml dietiléterrel mossuk, majd 100 ml acetonnal. Egy éjjelen át való szárítás után a szilárd anyagot az

1. példában leírt eljárás szerint tisztítjuk.

Kitermelés: 5,5 g lényegében tiszta L 17046 antibiotikum.

8. példa

2.5 g teikoplanin A2 és teikoplanin A.-, faktor keveréket (A2 faktor: 80 tömeg%, A3 faktor: 9,5 tümcg%, víz: 10,0 tömeg%, szervetlen sók: 0,5 tömeg%) az

1. példában leírt módon kezelünk, HC1 gáz helyett HBr felhasználásával, és a megfelelő mennyiségű oldószer és reagensek alkalmazásával.

Kitermelés: 1,6 g lényegében tiszta L17046 antibiotikum.

9■ példa

4.5 g teikoplanin komplexe — amely 10 tömeg % vizet tartalmaz — az 5. példában leírt módon kezelünk, kénsav helyett száraz mctánszulfonsav felhasználásával és a megfelelő mennyiségű oldószer és reagensek alkalmazásával.

Kitermelés: 0,9 és 0,7 g (oszlopkromatográfia) lényegében tiszta L 17046 antibiotikum.

Megjegyezzük, hogy azoknak a példáknak az esetében, amelyeknél teikoplanin A2 faktorból indulunk

8

ki, amennyiben az A2 faktort A3, A4 vagy A5 faktorokkal helyettesítjük, azonos eljárást követve azonos hozammal kapjuk a kívánt terméket.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás L17046 antibiotikum előállítására, melynek jellemzői:

a) a fajlagos forgatás

(alfa)g> értéke - 44° (c = 1%, DMF);

b) vízben korlátlanul oldódik pH 8,0 feletti; dime tilformamidban, dimctilszniroxidban. propilénglikolban és mclilcellos/olvban ugyancsak korlátlanul oldható pH 8,0 feletti; kevéssé oldható metanolban; csaknem oldhatatlan n-hexánban, dietiléterben és acetonban;

c) UV abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja:

— 0,1 N sósavban:

lambdamax 278 unt (Ej^m = 67,1),

— 0,1 N NaOH ban:

larnbdamax 297 nm (E}fni = 124,1),

— foszfát-pufferben, pH 7,4-n:

lambda,,mx 277 nm (Ej^m = 75,0);

d) ÍR spektrumában — nujolban — a következő abszorpciós maximumok figyelhetők meg (cm-1): 3700-2000, 2970-2850 (nujol), 1655, 1610, 1595, 1515, 1490, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1220, 1145, 1060, 1010, 890, 850, 820, 720 (nujol);

c) elem-analízise, amelyet azt követően hajlottunk végre, hogy a mintát kb. 140 °C-on közömbös atmoszférában szárítottunk (tömegveszteség = 8,4 %), a következő közelítő %-os összetételt mutatja (átlag):

C 56,74%, hidrogén 4,27%, nitrogén 7,99%, klór 5,11%, hamu 0,6%;

14

f) Rf értékek a következő TLC

rendszerekben

eluáló rendszer (térf./térf.)

Rf érték

acetonitril/víz 75 :25

0,53

(szilikagél, Merck 60 F254)

acetonitril / 5 %-os vizes nátriumszulfát 30:70

0,54

(szilikagél. Merek szilanizált 60 Fa?,,)

Előhívás: UV Fény, 254 nm; 3%-os etanolos ninhidrin; 1%-os metanolos fluoreszkamin;

g) retenciós idő (tR) 10,8 perc; az elemzést inverz fázisú HPLC-vel végezzük. 150X4,0 inm-es ZorbaxR ODS (5—6 jum) oszloppal (A Zorbax név a Dupont Co. védjegye egy oktadecilszilán szilika mátrixa); az eluálást 0—50%-lineáris gradienssel végezzük, 40 perc alatt, „B oldat az A oldatban” rendszerben: A oldat: 25 nM NaH2P04/acetonitril 9:1,

0,1 N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva,

B oldat: 25 nM NaH2P04/acetonitril 3 :7,

0,1 N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva, áramlási sebesség 2 ml/pcrc, belső standard 3,5-dibidroxi-toluol, tR 5,60 perc;

h) az XH NMR spektrumot 270 MHz-en vettük fel DMSO-d6-ban 60°C-on, 20 mg/ml minta-koncentráció mellett (belső standard, TMS delta - 0,00 ppm).

Néhány NMR adatot, amelyet D2Ü cserét és szelektív szétkapcsolást magukban foglaló kísérletek

198 090

5

10

15

20

25

30

35

40

45

E0

55

30

65