198088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leukémiás sejtek szaporodását gátló, immunstimuláló hatású peptidek, az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
5 198 088 6 olyan 1%-os birka vörösvél lest szuszpcnzióval, amelyet előzőleg háromszor mostunk 0,9%-os nátriumklorid-oldalttal, 10 percig tartó, 2500 fordulat/perces centrifugálásokat követően. A nulladik napon végzett immunizálással egy időben 100 mg/kg-os i.p. ciklofoszfamid kezeléssel visszaszorítjuk az immunrendszer aktivitását. A vizsgálat 3. napján az állatok a peptideket 5, 50 és esetenként 100 ing/kg intraperitoneális dózisban kapják. A vizsgálat 6. napján retroorbitálisan vért veszünk az egerektől, és meghatározzuk a savók anti-birkavörösvértest-titerét. A peptidek kezdő kezelési időpontjául a szuprimált immunrendszer határozottan gátolt állapotát választjuk. À peptidek hatását a gátlás oldásának %-ában fejezzük ki (G%). Ezt tartalmazza a 3. táblázat. A 3. táblázat adataiból látható, hogy a találmány szerinti peptidek különböző mértékben stimulálják a ciklofoszfamiddal gátolt immunrendszert CEI.P egerekben. A citosztatikumokra jellemző immimszupresszív hatást az új vegyieteknél nem mutattunk ki. 3. táblázat A ciklofoszfamiddal gátolt ellenanyag-termelésű egerekben a gátlás oldása (G %) A primer immunválasz helyreállítása, G% A peptidek dózisa: [mg/kg] 100 50 5 A vizsgált peptidek 1. Glp-Lys-NH, 133,3 123,8 2. Glp-Glu-Lys-NHj 3,0 23,0 3. Arg-Lys-Glu-MHj 47,6 78,1 4. Arg-Lvs-Glu 76,9 61,5 5. Arg-Lys-Gln 14,8 6. Leu-Vai-Ala 100,0 73,3 7. Arg-Örn-Asp-Val-Nllj 28,0 8. Arg-Orn-Asp-Val 23,8 9. Lys-Glu Lys-Lys 37,7 15,5 10. Lys-Le-Lys-Lys 80,7 38,4 11. Lys-Asp-Leu-Lys 53,8 38,4 12. G!u-Lcu-Val-A!a 32,8 20,9 14. Leu-Pro-Ala-Gly 56,8 34,0 Kontroll - CFY A képletben a Kontroll a vizsgálandó anyagot nem kapott, nem kezeit, a Teszt a vizsgálandó anyagot is kapott kezelt, míg a CFY a 100 mg/kg ciklofoszfamiddal kezelt állatok ellenanyag-termelése. 4. Oxazolonnal kiváltott kontakt dermatitis test A vizsgálatban az Evans, D. P- és munkatársai által leírt Lür.J.Pharmac.,4.?, 403-403. (1971)] állatkísérletes modell egy módosított változatát használtuk. 20—22 g-os, hím nemű, CFLP egerek hasbőrét szőrtelenítés után 0,1 ml 2%-os, napraforgóolajos oxazolon-oldattal [4-etoximetil-2-fenil-oxazolln. Sigma gyárim.] ecseteljük. 7 nappal az érzékenyitést (ecsc- 4 teléül) követően 10 pl 2 ',V'-os aecltums oxa/oloiioldattal a kísérleti állatok jobb fülén gyulladásos reakciót váltunk ki, és ezzel egy időben az állatokat a vizsgálandó hatóanyag 1, illetve 2 mg/kg dózisával kezeljük i.p. injekció formájában. A hatóanyagot fiziológiás konyhasó-oldalban okijuk úgy, hogy a dózisnak megfelelő hatóanyagmenuyiség 0,5 inl/10 g állat/térfogatban legyen oldva. A gyulladasgatlűs mértékét úgy határozzuk meg, hogy a kezelést követő 24. órában az állatokat megöljük, majd levágjuk a jobb és a bal fülüket. A jobb fülnek a bal fülhöz képest bekövetkezett százalékos súlynövekedése jellemző a vizsgálat során előidézett gyulladás mértekére, mig a kezelt állatoknál a kezeletlen kontrolihoz képest mutatkozó százalékos súlynövekedés-csökkenés a gyulladásgátló hatás erősségével arányos. A 4. táblázatban az egyes anyagokkal ily módon kapott súly* növckedés-csökkcncst [gyuliadásgátlást] tüntetjük fel a kezeletlen kontroll 'r-ában. 4. táblázat Az oxazolonnal kiváltott gyulladás gátlása a peptidekkel történő kezelést követő 24. ólában Gátlás a kontroll '/’í-ában A peptidek dózisa 1 mg/kg 2 mg/kg A vizsgált peptidek Glp-Lys-NHj 62 61 Lys-Glu-Lys-Lys-OH 22 79 Lys-LcuLys-Lys-OH 30 41 Gíu-Lcu-Va!-Ala-OH 40 Lcu-pro-Ála-Gly-OH 55 5. Fagociiozisra gyakorolt hatás, in vivő 22-23 §-os, hím nemű. CFLP egereket négy, 8-12 állatból álló csoportra osztunk, majd a kezelendő csoportok egyedeit kot napon át Gip-Lys-Niii-mandeláttal kezeljük. A kezelés abban áll, hogy az állatoknak naponta egy alkalommal s.c. 0.1 1, illetve 10 mg/kg dózisban, fiziológiás konyhasó-oldatban oldva beadjuk a hatóanyagot. Az utolsó kezelés utáni 24, órában megvizsgáljuk a peritoncális cxsudatum sejtek (PEC) élesztő sejteket bekebelező képességet. A kapott eredményeket az 5. táblázatban foglaltuk össze. A táblázatban feltüntetett 3c ± S.E.M. adatok a 100 PEC sejt által bekebelezett élesztősejtek számát jelentik. 5. táblázat A PEC fagocitáió aktivitása a kezelést követő 24. órában Fagocita-aktivitás: J±S.E.M. Dózis [mg/kg]-ban : 0.0 0.1 1.0 10 179,7± ±3,6 182,3± ±3,5 209,3 ± ±8,6 244,8 ± ±4,3 Student-féle t-teszt: p<0,05 p<0,01 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 65
