198088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leukémiás sejtek szaporodását gátló, immunstimuláló hatású peptidek, az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
198 088 4 fel, míg a jobb oldalin a kontroll %-ában (c%) fejezzük ki a sejtszám alakulását a kezelés során az idő függvényében. A peptid hatására a kezelést követő 24. órában a sejtszám stagnál, majd csak igen kis mértékben nő. Ez egyben arra is utal, hogy nem sejtölő, hanem sejtosztódást gátló hatásról van szó. Az új peptidek iumorsejt osztódást gátló hatását (72 órával a kezelést követően) az 1. táblázatban foglaljuk össze. A gátlás mértékét a kontroll %-ában fejezzük ki. A táblázat adataiból jól látható, hogy a vizsgált peptidek gátolják a K-562 emberi eritrolcukémiás sejtek szaporodását. 1. táblázat A K-562 sejtek szaporodásának gátlása a peptidekkel való kezelést követő 72. órában a kontroll %-ában kifejezve gátlás [c%] À peptidek koncentrációja: lOjughn! 1/ig/ml A vizsgált peptidek í. Glp-Ly-NHí 42 20 2. Glp-Glu-Lys-NH2 55 40 3. Arg-Lys-Glu-NH2 52 40 4. Arg-Lys-Glu 48 40 5. Arg-Lys-GIn 30 25 6. Lcu-Val-Ala 52 38 7. Arg-0 rn-Asp-Val-NH 2 51 35 8. Arg-Orr.-Asp-Val 54 35 9. Lys-Glu-Lys-Lys 40 28 10. Lys-Leu-Lys-Lys 70 65 11. Lys-Asp-Leu-Lys 55 40 12. Glu-Leu-Val-Ala 65 55 13. Leu-Pro-Ala-Gly 70 45 A. Arg-Lys-Asp-Val-Tyr (TP 5) 32 B. Arg-Lys-Asp-Val (TP 4) 4 A peptidek hatására az Azathioprinnel gátolt limfociták E-rozettaképző aktivitása különböző mértékben megnő. A peptidek a vizsgált dózis-tartományban a limfociták E-rozettaképző aktivitását nem gá- 5 tolják. Az eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze bemutatva, hogy az egyes peptidek milyen mértékben oldják azt a gátlást (R%), amelyet az Azathiprin fejt ki a limfociták E-rozettaképző aktivitására. A 2. táblázat adataiból látható, hogy a vizsgált 10 peptidek fokozzák a gátolt limfociták E-rozettaképző képességet, így immunstimuláló hatásúak. 15 20 25 30 35 40 2. táblázat Azathioprinnel gátolt limfociták E-rozettaképző képességének helyreállítása a gátlás oldásának %-ában kifejezve (R%) A gátlás oldása [R%] A peptidek koncentrációja: 10“N mól/literben Az N érteke: 11 9 7 5 3 A vizsgált peptidek 1. Glp-Lys-NH2 10.0 25,0 36,6 9,9 33,0 2. Gip-Glu-Lys-NHí 37.1 24,3 31.7 20,2 25,4 3. Arg-Lys-Glu-NH2 17,0 24,8 15,6 22,6 24,3 4. Arg-Lys-Glu 27,5 24,0 24,7 24,6 24,5 5. Arg-Lys-GIn 34,5 26,3 27,0 27,4 26,2 7. Arg-Orn-Asp-Val-NHj 24,5 34,4 22,0 33,5 36,7 8. Arg-Orn-Asp-Val 23,8 21,3 17,8 18,9 21,9 9. Lys-Glu-Lys-Lys 26,6 21,1 25,2 16,3 22,9 10. Lys-Leu-Lys-Lys 45,1 33,6 28,8 36,8 35,8 11. Lys-Asp-Lcu-Lys 8,6 8,9 16,5 21,9 13,7 A. Arg-Lys-Asp-Val-Tyr (TP 5) 19,4 30,0 38,7 29,3 31,7 B. Arg-Iys-Asp-Val (TP5) 34,0 32,5 46,4 35,4 35,4 Az „A” és „B” jelű peptidek ismert [185 263 sz. magyar szabadalmi leírás] összehasonlító anyagok. 2. T-limfocita proUferációt gátló hatás (in vitro) 45 Az ,.A” és „B" jelű peptidek ismert összehasonlító anyagok. R, _ (EXP-ERFÇ - AZ-ERFC) ^ ERFC - AZ-ERFC A T-limfocita proliferáció gátló hatást az Azatliioprinnel [6- ( Î - me til -4-nitro-imidazoI-5-il-tio)-purinJ gátolt E-rozetta tesztben vizsgáltuk [Thymus, 7, 195. (1980)]. 200 pl egészséges limfocita sejtszuszpenzióln 500 jil/ml Azathioprint és 200 pl külön-külön 10-3 —10 mól/liter koncentrációjú vizsgálandó anyagi adunk HBBS jelű (Flow, Nagy-Britannia) pufferbe Az elegyet 60 percig 5 % szen-dioxidot tartalmaz levegőben, 37 C-on inkubáljuk, majd hozzáadur 2UU jíI 1%-os birka vörösvértest szuszpenziót. A k p°tt keveréket 5 percig 1000/perc fordulatszámc centrifugáljuk, majd a felülúszót dekantáljuk és Buszpenzióban legalább 400 sejtből mikrosz.kc alatt összeszámoljuk az E-rozettát képező limfoc ERFC = az E-rozettát képező limfociták száma Azathioprin hozzáadása nélkül, AZ-ERFC = az E-rozettát képező limfociták száma Azathioprin hozzáadására, EXP—ERFC = az E-rozettát képező limfociták száma 55 Azathioprin és a vizsgálandó anyag jelenlétében. 3. Ellenanyag-termelésre gyakorolt hatás egérben 50 Az in vivo ellenanyag-termelésre gyakorolt hatást 100 mg/testsúlykilogramm dózisú ciklofoszfamiddal {Cyclophosphamid. 2-[bisz(2-klór-etil)-amino]-tetrahidro-2H-l,3,2-oxazafoszforin-2-oxid} kezelt CELP egereken vizsgáltuk [Z. Naturforsch., 353, 1476. 65 (1980)]. Az egereket intraperitoneálisan immunizáljuk 3
