198076. lajstromszámú szabadalom • Eljárás O-alkilezett glicerofoszfo- és dezoxi-glicerofoszfoszerin származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
3 198 07f 4 jelentése esetén Y jelentése —OR általános képlctű csoport, az utóbbi képletben R jelentése a fent megadott, és a többi A vagy X vagy Y jelentése halogénatom, 2-4 szénatomos trifluor-alkoxi-csoport, vagy X esetén hidrogénatom is lehet - egy (III) általános képlctű L-szcrin-származékkal — a képletben Z1 jelentése benzil-, terc-butil-, ftálimidometil-, izopropil-, benzhidrilcsoport, vagy más, szokásos módon, például katalitikus hidrogénezéssel, hidrazonilízissel, sósavas kezeléssel, nátrium-tiofenoláttal vagy hidrolízissel könnyen lehasítható védőcsoport, Z2 jelentése N-benzoxi-karbonil-, N-tercbutoxi-karbonil-, N-ftaloil-csoport, vagy más, szokásos módon, például katalitikus hidrogénezéssel, hidrazonilízissel, sósavas vagy hangyasavas kezeléssel eltávolítható védőcsoport — kondenzálunk, szokásos módon, kondenzálószer jelenlétében, vagy b) egy fenti (II) általános képlctű vegyületet - a képletben X vagy Y jelentése (b) általános képletű csoport, ahol R1 jelentése OH vagy O-és R2 jelentése metoxiesoport vagy 2—6 szénatomos alkoxiesoport, amely adott esetben klórvagy brómatommal, hidroxil-, amino-, metil-amino-, dimetil- 4-amino- vagy N (CI 13)3 csoporttal szubsztituűlva lehet — L-szerinnel reagáltatunk, foszfolipáz D katalizátor jelenlétében. A kapott glicero-, illetve dezoxiglicerofoszfo-szerinszármazékokból a védőcsoportokat adott esetben eltávolítjuk, majd a vegyületeket a szokásos módon izoláljuk, és kívánt esetben bázissal kezelve sóvá alakítjuk. Az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sóit ismert módon állíthatjuk elő, bázissal végzett kezeléssel. A diammóniumsókat például úgy állíthatjuk elő, hogy az (I) általános képletű vegyidet kloroformos oldatát vizes ammóniaoldattal kezeljük, majd a kapott sót oszlopkromatográfiás eljárással izoláljuk, az eluálást 25 %-os ammóniaoldattal telített kloroform és metanol 2:1 térfogatarányú elegyével végezzük. A dinátriumsókat például úgy állíthatjuk elő, hogy a diammóniumsót nátriumsó-formában lévő karboximetil-ccllulózzal (Servacel CM 52)kczcljük. A (II) általános képletű vegyüld (III) általános képletű védett szerinnel való a) eljárás szerinti kondenzáláskor a mólarány 1:1 — 1:5, a kondenzálást szerves bázis — például piridin — jelenlétében folytatjuk, amely mellett további oldószereket — például kloroformot - is használhatunk, és a reakciót kondenzálószer — például 2,4,6-triizopropil-benzoszulfoklorid - jelenlétében játszatjuk le, szobahőmérsékleten. A védőcsoportokat ezt követően sósavas kezeléssel lehasítjuk, a képződött hidrogén-ldoridot ammónia-tartalmú oldatokkal kezelve stabil ammóniumsóvá alakítjuk, és kromatográfiás tisztítást végzünk. Az (I) általános képlctű vegyületek találmány szerinti enzimatikus előállítását lényegében úgy végezzük, hogy a (II) általános képletű vegyületeket vizes oldatban vagy szuszpenzióban, szerves oldószer — például éter és/vagy kloroform — és egy puffer — például nátrium-acetát vagy Tris-puffer — hozzáadása mellett 4,8 és 8,5 közötti pH-értéken, egy kalciumsó - amelynek mólkoncentrációja előnyösen 0,01—0,1 — jelenlétében L-szerinnel reagáltatjuk, foszfolipáz D jelenlétében, 0 és 60 °C közötti hőmérsékleten. Ennek az eljárásnak különös előnye, hogy a szerint védőcsoportok nélkül — amelyek bevitele gyakran költséges művelet — használhatjuk. A reakció befejeződése után — amelyet vékonyréteg-kromalográfiásan követünk — a reakcióelegyhez az enzim inaktiválására 0,1 mól/1 EDTA-oldatot adunk, és végül a kapott foszfatidil-szerin-származékot a szokásos módon — például kromatográfiás eljárások alkalmazásával — izoláljuk és tisztítjuk. Meglepő, és előre egyáltalán nem látható módon azt tapasztaltuk, hogy számos halogén-tartalmú szintetikus O-alkilezett glicero-foszforsav-alkil-észter — amely nem természetes vegyület — alkalmas az (I) általános képletű vegyületek enzim-katalizálta szintézisére. Az eljárással mind a racemátok, mind az optikai sztereoizomerek előállíthatok. Az eljárásban használt foszfolipáz D-t ismert eljárások segítségével állíthatjuk elő fehérkáposztából, oly módon, hogy azt homogenizáljuk, a homogenizátumot szűrjük és a vizes fázist 45 percen át 25 000 g-vel centrifugáljuk. A tiszta felüiúszóhoz 2 térfogat acctont adunk. A kapott csapadékot dekantáljuk, és a maradékot 20 percen át 13 000 g-vel 5 °C-on centrifugáljuk. Az aceton-nedves enzimtartalmú preparátumot vákuumban, foszfor-pentoxid felett szárítjuk. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek biológiaüag igen aktívak. Kifejezett tumorellenes aktivitással rendelkeznek, például Ehrlich ascites tumorsejtek ellen. In vitro hatásuk a klinikai gyakorlatban már rákellenes hatású szerként használt l-0-aIkil-2-0-metilglicero-3-foszfo-kolin (1. táblázat, A vegyüiet) hatásával [P. G. Mundér, M. Modellel, W. Bausert, H. F. Oettgcn és O. Wcstphal: ,,Augmenting Agents in Cancer Therapy”, 441-458. oldal, Raven Press, New York 1981; W. E. Berdel, H. Schlehe, U. Fink, B. Emmerich, P. A. Maubach, H. P. Emslander, S. Daum és J. Rastetter: Cancer 50, 2011-2015 (1982)] összehasonlítható. A fenti ismert vegyülettől eltérően, a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek hatása már alacsonyabb koncentrációkban is megnyilvánul (1. táblázat). Ezzel bizonyítottuk, hogy az alkil-foszfolipid analógok tumorellenes hatása — az eddigi feltételezéssel ellentétben [D. R. Hoffmann, J. D. Stanley, R. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
