198020. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-hidroxi-2-piridon-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 198 020 vizsgálatára a tesztelendő készítményből hígítás-sorozatot (31,25 0,35 fig/ml, 8 lépés) készítünk mikrotitrálás-lemezen. A lemez valamennyi U-alakú mélyedését a Trichophyton mentagrphytes bőrgomba 104 telepképző egységével (CFU) oltjuk be. 18 óra hoszszat tartó, 30 °C-on folytatott inkubálás után (közeg: fiziológiás NaCl-oldattalmossuk (kétszer centrifugáljuk), és csíraszám-meghatározás céljából maláta-agar-lemezre kenjük egy automata eszköz segítségével. 30 °C-on, 3 napig tartó tenyésztés után a telepeket megszámoljuk és a CFU/ml értéket kiszámítjuk. A kezeletlen kontrollal való összehasonlításnál a csíraszátn csökkenését százalékban meghatározzuk (kontroll = = 0%). A hatás erősségét standard készítményen, pl. Clotrimazolon mérjük, a Clotrimazol a (VII) általános képletű vegyület kereskedelmi neve. Az I. táblázatból kitűnik, hogy a találmány szerinti vegyületeknél a Clotrimazolhoz viszonyítva rendkívül kis számú CFU mutatkozik, ez azt jelenti, hogy a találmány szerinti vegyületek fungicid vagy pusztító Íratása a standard szerhez képest jelentősen erősebb. 1. táblázat Vegyület száma CFU/ml száma X (n=4) A CFU csökkenése a kontrolihoz képest %-ban 1. 0,0 100,00 9. 0,0 100,00 15. 1,0 99,32 17. 1,5 98,98 Clotrimazol 63,6 57,00 Fertőzés kontroll 147,9 0,00 n = a mérésértékek száma X = középérték 5 A találmány szerinti vegyületek nagymértékű in vivo hatásosságát például Trichophyton mentagrophytes gombával kísérlet céljából fertőzött laborállatok kezelési eredményeivel szemléltetjük. Ennek érdekében két, illetve négy 450 - 500 g súlyú tengerimalacot (Pirbright white fajta) 1,5xl04 konidium/állat mennyiséggel fertőzünk az epidermiszben, 6 fertőzési pontra elosztva. A fertőzés előtt 4 és 3 nappal 0,3 t%os készítményoldatot viszünk fel az állatokra a jobb hátoldal 3 pontjára. A baloldalt 3 fertőzési ponton hatóanyag nélküli készítménnyel (kötőanyaggal) ke° zeljük a már említett módon. A találmány szerinti vegyületekkel kezelt állatok mellett két állatot Clotrimazoilal kezelünk és két fertőzött állatot kezeletlenül hagyunk (fertőzés-kontroli). 20 A 2. táblázatból látható, hogy a találmány szerinti vegyületek jelentőséen nagyobb különbséget mutatnak a gomba átmérőjében (mm), mint a Clotrlmazollal kezeltek. Ez azt jelenti, hogy a találmány szerinti készítmények antimikotikus hatása jelentősen felülmúlja a Clotrimazol hatását. 25 30 35 2. táblázat gombák (átmérő mm-ben) , Koncentráció Vegyület Az állatok kötőanyag - kontroll Vegyület* kötőanyag Különbség száma száma n fi] ' (s) n x2 (s) x, x2(%) Dermal 2x0,3% 1 4 12 14,8 (2,7) 12 9.2 (3,4) 5,6 (160,0) 3 4 12 13,7 (2,2) 12 8,3 (1,2) 5,4 (154,2) 9 2 6 14,0 (3,4) 6 9,1 (1,8) 4,9 (140,0) 26 2 6 15,0 fi,5) 6 7,8 (0,4) 7,2 (205,7) Clotrimazol 4 12 13,9 (2,0) 12 10,4 (1,8) 3,5 (100,0) Fertőzés kontroll-2 12 13,7 (U) n = mérési értékek száma ft = középérték (s) = standard eltérés 7
