197945. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptid antibiotikumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó készítmények előállítására
197945 párna alakúak vagy alaktalanok. Méretük erősen változó, 12X20 pm-tól 80X120 pm-ig. Közös burkolat vagy ragacsos réteg köti össze őket. Kettős körvonalúak. Beágyazódnak az agarba. A 2—10 vagy több sporangiumot tartalmazó csomók teljes tömegükben 50—300 mikron méretűek. Mikrokolónia: Kitin-agaron 2 heti inkubáció után. A szélén vegetatív sejtek láncai helyezkednek el rácsos vagy cikcakkos alakban. Az egyes sejtek kúszó mozgása figyelhető meg, a sejtcsomók azonban nem mutatnak mozgást. 2. táblázat A K481-B101 kaziton-Mg++ agaron (McCurdy)28°C-on 6 nap alatt kifejtett kultúra jellemzői Alak: köralakú Felület: sima, később részben ráncos Emelkedés: emelkedett Perem: teljesen vagy kissé szabálytalan, határozott kiemelkedések (nyelv, toll vagy rizoid alakban) nincsenek Optikai tulajdonság: félig átlátszó vagy átlátszatlan A telep színe: halvány zöldessárga Diffundáló pigment: nincs Kitin-agaron, 28°C-on 3 heti inkubáció után mutatott fejlődés: vékony, áttetsző, halványsárga vagy színtelen. A széleken vastag átlátszatlan, sárgásfehér. A sporangiumok koncentrikus alakban jelennek meg a széleken. Az agart gyengén erodálja vagy behatol az agarba. 5 3. táblázat A K481-B101 fiziológiai jellemzői Hidrolizáló képesség Oldható keményítő + burgonyakeményítő + karboximetil-cellulóz-nátrium + cellulóz — agar — kitin + nátrium-alginát — nátrium-polipektát — zselatin + kazein + Növekedés táptalajokon Simon-féle citrát-agar — Christensen-féle citrát-agar — glükóz-ammóniumsó agar — aszparagin-ammóniumsó agar + Termelés Indol — hidrogén-szulfid + 4 6 acetcin (VP-reakció) — ureáz + oxidáz + kataláz + Lzálóképesség Micrococcus luteus PCI 1001 és ATCC 9341 élő sejtjei — autoklávozott élesztősejtek + Reakciók Tej koagulálása: — tej peptonizálása + nátrium-klorid tűrés 1,0% vagy kisebb NaCl tartalomnál növekedés van; 2,0% vagy nagyobb NaCl tartalomnál növekedés nincs pH-tíírés pH 5,5,5—10,5: jó növekedés pH 5,0: gyenge növekedés pH 4,5 és 11,5: nincs növekedés növekedési hőmérséklet maximális növekedés 37°C-nál növekedési tartomány 15—42°C nincs növekedés 10°C- nál és 45°C-nál oxidációs vagy fermen- oxidativ (Hugh and tatív reakció Leifson közegei)) Az antibiotikumok mikrobiológiai úton történő termelését az alábbi 1. példa szemlélteti. 1. példa A Polyangium brachysporum K481-B101 törzstenyészetét 28°C .hőmérsékleten 3 napig szaporítottuk ferde agar közegen: 0,5% oldható keményítő, 0,5% glükóz, 0,1% húskivonat, 0,1% élesztőkivonat, 0,2% Nz-kazein, 0,2% nátrium-klorid, 0,1% kalcium-karbonát és 1,6 agar (pH 7,0). Egy jól kifejlett ferde agaron kultúrát alkalmaztunk a vegetatív közeg beoltására; (közeg: 2% kukoricakeményítő, 3% szójaliszt, 0,3% MgS04.7H20 és 1% C.aC03, pH sterilizálás előtt 7,0). Forgó rázóasztalon történő inkubálás után (hőmérséklet: 28°C, rázási sebesség 250 fordulat perceiként). A tenyészet 5 ml-jét átvittük egy 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba, amelybe előzetesen 100 ml termelő tápközeget helyeztünk (a termelő tápkőzeg összetétele egyezik a vegetatív tápközegével). Az antibiotikum termelését papírkorongos agar-diffdziós módszerrel ellenőriztük; vizsgáló mikroorganizmusként Candida albicans A9540 törzset alkalmaztunk. A fermentációt 28°C hőmérsékleten 4 napig folytattuk rázóasztalon; az antibiotikum-termelés 100 pg/ml maximumot ért el. A fermentációt keverő fermentorban is lefolytattuk. Egy 20 literes edényben levő 10 liter termelő tápközeg beoltására a lom-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
