197940. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fehérje-termékek előállítására transzformált baktériumok segítségével
197940 nek megszűnése esetén lehetővé válik, hogy a sejt normális ütemben növekedjen, azaz log fázisú növekedés az indukálódás után a Tízis bekövetkezéséig. Az S és R génekhez hasonlóan a kil gén működését is a cl represszor szabályozza közvetett módon, az N génen keresztül. [Greer, Virology 66, 589— 604 (1975)]. A hőmérsékletre érzékeny lizogéneket már sokoldalúan tanulmányozták. Például Campbell is ismertette őket [Virology 14, 22—32 (1961)]. A cI857 gén egy hőmérsékletre érzékeny cl mutáns. Csak 38°C-on vagy ez alatti hőmérsékleten működőképes. [E. Sussman és munkatársai C. R. H. Acad. Sei. Paris 254, 1517—1519 (1962)]. Más fajoknál hasonló fág rendszerek ismeretesek. Például Lomovszkaja és társai [J. Virol. 9, 258—262 (1972)] a Streptomyces baktériumot fertőző, mérsékelt fertőzőképességű fág hőmérsékletre érzékeny mutánsairól számolnak be; Flock [Mol. Gen. Genet. 155, 241—247 (1977)] a Bacillus baktériumot fertőző, mérsékelt fertőzőképességű phi-105 fág hőmérséklettel szemben érzékeny mutánsairól tesz említést; Botstein és társai [Nature 251, 584—588 (1974)] a Salmonella baktériumot mérsékelt fertőzőképességű P22 fág hőmérséklettel szemben érzékeny mutánsait ismerteti. Jostrom és társai [J. Bacteriol. 119, 19—32 (1974)] és Thompson [J. Bacteriol. 129, 778—788 (1977)] és a Staphylococcus baktériumot fertőző, mérsékelt fertőzőképességű phi-ll fág hőmérséklettel szemben érzékeny mutánsairól számolnak be; továbbá Miller és társai [Virol. 59, 566—569 (1974)] a Pseudomonas baktérium hőmérséklettel szemben érzékeny fágjairól tesznek említést. Botstein és társai [Ann. Rev. Genetics 16, 61—83 (1982)] beszámolójából ismeretes, hogy a lambda fágot abszorbeálni képes Salmonella baktériumnál észleltek lambda endolízín enzim hatására bekövetkező lízist. Perricaudet és társai [FEBS tett. 56, 7— 11 (1975)] a lambda fág DNS lánca 58. és 71. helye közötti rész génjeinek deléciójáról (A58—71) tesznek említést, mely szegmens magában foglalja a lambda int, xis, red, gam, cIII és a kil géneket. Hershberger és társai a 2 084 584. számú európai szabadalmi bejelentésben eljárást ismertetnek, melyben egy plazmid stabilizálására és szelektálására gazdasejtként egy lizogén gazdasejtet alkalmaznak. Leírják például egy hiányos cl gént tartalmazó lizogén transzformálását egy funkcióképes cl gént hordozó plazmiddal. A találmány egyik megvalósítási módja szerint a funkcióképes cl gén a cI857 gén. Ismert, hogy az átvihető elemek, azaz olyan gének, melyek a gazdasejt kromoszóma rekombinációs mechanizmusától függetlenül tudnak rekombinálódní, jelölőként bevihetők a gazdasejtekbe. Ross és* társai [Cell 16, 721—731 (1979)] ismertetik a deléciók és 3 inverziók fizikai szerkezetét, melyeket a tnlO jelű átvihető, tetraciklinnel szembeni rezisztenciát biztosító elemmel hoztak létre. Davis és társai a „Baktérium genetika" című munkájukban [Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1980)] átvihető elemek felhasználási módjait ismertetik. Ruvkun és társai [Nature 289, 85—88 (1981)] az átvihető, kanamicinnel és neomicinnel szembeni rezisztenciát biztosító elem, a tn5 átvitelét ismertetik Rhizobium melilotíi baktérium kromoszómájának DNS-ébe, a *n5 elemet hordozó plazmid konjugálásával, majd homológ rekombinációval. A 74 808. számú európai szabadalmi bejelentés heterológ gén integrálását ismerteti a homológ szomszédos szekvenciák jelenlétének eredményeképpen kialakuló rekombinációval. A találmány tárgya eljárás baktériumokban termék előállítására mérsékelt fertőzőképességű fágokból származó endolízin-kódoló gének felhasználásával. A találmány értelmében a) egy hömérsékletérzékeny baktériumtörzset, amely hőmérsékletérzékeny fág represszor gént és funkcionális lizozim-kódoló fág géneket úgy tartalmaz, hogy a Üzozim-kódoló gének permisszív körülmények között gátolva vannak, és restriktiv körülmények között kifejeződnek, egy DNS molekulával transzformálunk, amely a terméket direkt vagy indirekt módon kifejezi; b) a transzformált törzset permisszív, a termék képződésének kedvező körülmények között tenyésztjük; majd c) a hőmérséklet megemelésével restriktiv körülményeket teremtünk, és d) adott esetben a terméket a tenyészközegből vagy annak koncentrátumából kinyerjük. A találmány másik tárgya olyan eljárás termék előállítására baktériumban, mely szerint a) egy, a terméket előállító baktériumot egy olyan fág DNS szekvenciával transzformáljuk, amely egy hőmérséklet érzékeny fág represszor gént és lizozim-kódoló fág géneket hordoz, úgy, hogy a lizozim-kódoló gének permísszív körülmények között gátolva vannak, míg restriktiv körülmények között kifejeződnek, ezáltal litikussá téve a baktériumot, b) a transzformált baktériumot permiszszív körülmények között úgy tenyésztjük, hogy termelődjön a kívánt termék, majd c) a hőmérséklet emelésével restriktiv körülményeket teremtünk, majd d) adott esetben kinyerjük a terméket a tenyészközegből vagy annak koncentrátumából. A találmány további tárgyát olyan DNS fraginens képezi, amely a következő elemekből áll: a) egy defektiv fág szekvencia, amely egy hőmérséklet érzékeny represszor gént és funk4 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
