197929. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklikus dezprolin-vazopresszin vazopresszin-antagonista vegyületek és a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

197929

A [l-(ß-merkapto-ß,ß-ciklopentametil0n-propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin - 7 - -dez-proIin-8-arginin] -vazopresszín B [l-(ß-merkapto-ß,ß-ciklopentametiten-propionsav)-2-(0-etil-D-tirozin)-4-valin - 8 - -arginin] -vazopresszín

C [ 1 - (ß-merkapto-ß,ß-ciklopentametiten-propionsav)-2-(0-etií-D-tirozin)-4-valin - 7 - -dez-proiin-8-arginin-9-dez-glicin] - vazopresszín

D [ 1 - (ß-merkapto-ß,ß-ciklopentametil0n-propionsav) -2- (O-etil-D-tirozin) -4- (a-amino-vajsav)-7-dez-prolin-8-arginin-9-dez-glicin] -vazopresszín

*: az a mért peptid-dózis (i. p. adagolás, pg/kg), amely az ozmolalitást (U02m) a vízhiányos szintről 300 mOzmól/kg H20- ra csökenti

A találmány szerinti eljárást közelebbről — a korlátozás szándéka nélkül — az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni.

1. példa

Pmp(4-MeBzl)-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys(4-MeBzl)-Arg(Tos)-Gly-BHA-gyanta szilárd fázisú szintézise

A cím szerinti gyantához kötött peptid szilárd fázisú szintézisét 1,19 mmól/g gyanta Boc-Gly-gyantából kiindulva végezzük. A kiindulási anyagot úgy állítjuk elő, hogy a (Boc-Gly)2Ó szimmetrikus anhidridet dimetil-formamidban reagáltatjuk a benzhidril-amin-gyantával. A hidrogén-klorid-só formájában lévő benzhidril-amin-gyantát az alábbi módon előkezeljük:

1) metilén-kloridban egy éjszakán át szuszpendáljuk

2) metilén-kloriddal négyszer 1 percen át mossuk

3) 7%-os diizopropil-etil-aminnal (DIEA) semlegesítjük

4) metilén-kloriddal hatszor mossuk 1 percen át

5) előzetesen vízmentesített dimetil-formamiddal kétszer 1 percen át mossuk.

A (Boc-Gly)20 szimmetrikus anhidridet és annak gyantaformáját az alábbiak szerint állítjuk elő.

0,35 g (2 mmól) Boc-GlyOH 10 ml metilén - -kloriddal készült oldatához 1 ml (1 mmól)

1 mól/1-es koncentrációjú metilén-kloridos diciklohexil-karbodiimid-oldatot adunk. Az elegyet rázógépen 10 percen át rázatjuk, majd szűrjük. A szilárd anyagot 3-szor 1 ml metilén-kloriddal mossuk. A szűrletet szobahőmérsékleten vákuumban 0,5 ml-re koncentráljuk. A maradékot dimetil-formamidban oldjuk. A kapcsolási reakció lejátszódása után (1—2 óra) a gyantát kétszer 1 percen át dimetil-formamiddal, majd négyszer 1 percen át metilén-kloriddal mossuk. A gyanta %-os terhelését kvantitatív ninhidrin-reakcióval és aminosav-analízissel határozzuk meg.

A megfelelően védett aminosavakat szekvenciálisán kapcsoljuk a Boc-Gly-gyantához,

7

Beckman 990 B peptid-szintetizátort alkalmazva. A Boc-Asn és Pmp(4-MeBzl) kivitelével az alábbi eljárást használjuk a kapcsolásra.

1) Metilén-kloridos mosás (háromszor 1 perc);

2) 50%-os metilén-kloridos TFA-val előmosás (egyszer 1 perc);

3) Védőcsoport eltávolítása 50%-os metilén - -kloridos TFA-val (30 perc);

4) Metilén - kloridos mosás (háromszor 1 perc),

5) 7%-os metilén-kloridos DlEA-oldattal előmosás (egyszer 1 perc);

6) 7%-os metilén-kloridos DIEA-oidattal semlegesítés (egyszer 10 perc);

7) Metilén - kloridos mosás (háromszor 1 perc);

8) Hozzáadunk 3 mmól védett aminosavat metilén-kloridban, majd 3 mmól DCC-t 10 ml 0,3 mól/l koncentrációjú metilénkloridos oldatban, és 2 órán át lejátszatjuk a kapcsolási reakciót;

9) Metilén - kloridos mosás (háromszor 1 perc);

10) 1:1 arányú etanol-metilén-klorid eleggyel mosás (háromszor 1 perc);

11) Metilén - kloridos mosás (háromszor 1 perc).

Az Asn aminosavmaradék hozzákapcsolására 6 mmól 1-hidroxi-benzotriazolt (HOBT) használunk, 10 ml 0,6 mól/l koncentrációjú dimetil-formamidos oldatban. Oldószerként akkor is vízmentes dimetil-formamidot használunk, mikor Pmp(4-MeBzI)-t kapcsolunk a gyantán lévő peptidlánchoz, 3 mmól 4-dimetil-aminopiridin kapcsolószer jelenlétében. A kapcsolási reakciók lefolyását ninhidrin-vizsgálattal követjük. A Cys tiolcsoportját és a ß,ß-peptametiten-ß-merkapto-propionsav (Pmp) tiolcsoportját 4-metil-benzil-csoporttal (4-MeBzl) védjük.

A kapott, védett peptidgyanta köztiterméket — azaz a [Pmp(4-MeBzl)-D-Tyr(Et)-Phe-Val-Asn-Cys(4-MeBzl )-Arg(Tos) -Gly-BHA-gyanta] köztiterméket — metilén-kloríddal alaposan kimossuk és egy éjszakán át vákuumban szárítjuk. 2,0 g cím szerinti terméket kapunk. A fenti eljárást használjuk más, gyantához kapcsolt lineáris oktapeptid-merkaptánok előállítására is.

2. példa

Pmp-D-Tyr( Et)-Phe-Val-Asn-Cys - Arg - -GlyNHj előállítása

2,0 g Pmp(4-MeBzl) -D-TyríEtj-Phe-Val- Asn-Cys^-MeBzl) -Arg(Tos) -Gly-BHA-gyantát 2,5 ml anizolban 40 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal reagáltatunk, 0°C-on, 50 percen keresztül. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradékot vízmentes éterrel kezeljük és a nyers pepiidet 50 ml gázmentesített dimetil-formamiddal és 50 ml 33%-os ecetsavval 4 1 vízbe extraháljuk. A

8

5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65