197919. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 10 béta-alkinil-ösztrén származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
197919 A következő táblázat a belső kód szerint FCE 24714 jelű, találmány szerinti vegyidet aromatáz-gátló hatását mutatja, összehasonlítva egy, a technika állásából ismert, hasonló szerkezetű vegyülettel. A táblázat tartalmazza a jól ismert, aromatázg’átló hatású aminoglutetimid (Merck Ludex, 10. kiadás, 65, oldal) aktivitására vonatkozó adatot is. TÁBLÁZAT Emberi placentalis aromataz gátlása in vitro 13 Vegyület ICso/nM 10-(2-propinil-ösztra-31-4-én-3,17-dion (összehasonlító vegyület) arai-noglutetinid 1750 (összehasonlító vegyület) 10ß-(2-propinil)-6-metilen-ösztra-1,4-dién-3,17- -dion (FCE 24717) 17 Az aromatázgátló aktivitást in vitro a következők szerint határoztuk meg. Az enzimrendszert emberi méhszövetek mikroszomális frakciójától ismert módon izoláltuk. A vizsgálathoz Thompson és Siiteri [E.A. Thompson és P.K. Siitéri, J. Bioi. Chem. 249, 5364, (1974)] módszerét — mely az aromatizálás arányát a 4-[ 1 ß,2ß-3H] androsztén-3,17-dionból való 3H20 felszabadulását mérve határozza meg — használtuk. Minden inkubálást vízfürdőn, rázás közben, 37°C hőmérsékleten, levegőben, 10 mM kálium-íoszfát-pufferban (pH 7,5), 100 mM KC1, 1 mM EDA és 1 mM ditiotreitol jelenlétében végeztünk. A kísérleteket úgy folytattuk le, hogy 1 ml inkubált térfogat 50 nM 4-[3H]-androsztén-diont, az inhibitor különböző koncentrációit, 100 pM NADPH-t és 0,05 mg mikroszomális proteint tartalmazott. 15 perces inkubálás után a reakciót leállítóttuk 5 ml kloroform hozzáadásával. 1500 x g-vel való centrifugáiás után 5 alikvotnyi (0,5 ml) mennyiséget eltávolítottunk a vizes fázisból, a képződött 3H20 meghatározására. Az egyes vegyületek azon koncentrációját, amely az aromatáz kontroll aktivitásának 50%-os csökkentéséhez szükséges (IC50), úgy határozzuk meg, hogy a gátlás %-os értékét az inhibitor-koncentráció logaritmusával szemben ábrázoló görbét veszünk fel. 1. példa lObeta- (2-propinil) -6-metilén-ösztr-4-én-3,17 -dión (I„ X=H, R2=H, R,= =CH2, Y=0, n=l, egyszeres kötés) 1,79 g nátrium-acetát, 53 ml absz. kloroform, 54 ml formaldehid-dietil - acetál, 6,80 ml foszforil-klorid és 3,0 g 1 Obeta-(2-propinil)-ösztr-4-én-3,17-dion keverékét 2 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A szobahőmérsékletre lehűtött reakcióelegyhez kevertetés közben hozzáadunk — ebben a sorrendben — 70 ml telített vizes kálium-karbonát-oldatot, 36 ml 2N vizes nátrium-hidroxidot és 70 ml vizet, majd a keveréket további 1 órán át kevertetjük. A rétegeket szétválasztjuk és a vizes fázist 35x50 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves kivonatokat 3x20 ml vízzel mossuk és Na2S04 fölött szárítjuk. Az oldószert ledesztilláljuk és a nyers anyagot 40 ml 2:1 dietil-éter:n-hexán elegyből átkristályosítjuk; így 1,5 g szilárd anyagot kapunk, amelyet Si02-n pillanat-kromatográfiásan továbbtisztítunk. Az eluálást 40:60 n-hexán:etil-acetát eleggyel végezve fehér kristályos termék alakjában 1,26 g cím szerinti vegyületet kapunk. Op. 190—191°C, NMR (CDC13), delta: 0,95 (3H, s), 2,03 (1H, t), 5,00 (1H, bs), 5,15 (1H, bs), 6,02 (1H, bs); ÍR (nujol), cm-': 3230, 2110, 1730, 1675, 1630, 1610, 915. Hasonló eljárással a következő vegyületek állíthatók elő: lObeta- (3-jód-2-propinil) -6-metilén-ösztr-4- -én-3,17-dion, lObeta- (3-bróm-2-propinil) -6-metilén-ösztr-4-én-3,17-dion, lObeta- (3-klór-2-propinil)-6-metilén-ösztr-4- -én-3,17-dion, lObeta-(3-fluor-2-propinil)-6-metilén-ösztr-4- -én-3,17-dion. 2. példa lObeta-(2-propinil)-6beta-bróm-ösztr-4-én - -3,17-dion (I., X=H, R2=H, R,=Br, Y=0, n=l, —- egyszeres kötés; IV., X=H, L=Br, n=l, ^ egyszeres kötés) 165 mg 10beta-(2-propinil)-ösztr-4-én-3,17 -diont feloldunk 4 ml szén-tetrakloridban és az oldathoz hozzáadunk 104 mg N-bróm-szukcinimidet és néhány kis benzoil-peroxid-kristályt. A keveréket 2 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk, majd még forrón szűrjük, a keletkezett szukcinimid eltávolítására. A szűrletet 50 ml metilén-kloriddal hígítjuk, vízzel mossuk, nátrium-szulfit-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a nyersterméket Si02-n kromatografáljuk, az eluálást 6:4 n-hexán.etil-acetát eleggyel végezve. 100 mg cím szerinti vegyületet kapunk sárgás hab alakjában. IR (nujol), cm“1: 3222, 2125, 1740, 1620, NMR (CDCI3), delta: 0,95 (3H, s), 2,03 (1H, t), 4,85 (1H, m), 5,80 (1H, bs). Hasonló módon eljárva a következő vegyületek állíthatók eJ5: 14 5 IC 15 2C 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
