197768. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TAN-749 antibiotikumok, és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 197768 A TAN-749 antibiotikumot a tenyészetből a mikrobák által termelt metabolitok elválasztására szokásosan alkalmazott eljárásokkal nyerhetjük ki. A TAN-749-et például — amely vízoldható, bázikus anyag, és így főleg a tenyészet szürletében található — az alábbi eljárással nyerhetjük ki a tenyészetből. A folyékony tenyészethez szűrési segédanyagot adunk, majd a tenyészetből szűréssel vagy centrifugálással eltávolítjuk a baktérium-sejteket. Az így kapott szűrlethez megfelelő hordozóanyagot adunk, a biológiailag aktív komponensek adszorbeálása céljából, majd az aktív komponenseket megfelelő oldószerrel eluálva a terméket elválasztjuk és visszanyerjük. Előnyösen alkalmazható kromatográfiás hordozóanyagként olyan anyagokat említhetünk, amelyek alkalmazásakor az anyagok elválasztását azok eltérő adszorbeálódó képességét — például aktívszén, cellulózpor vagy adszorpciós gyanták — vagy a funkciós csoportokban mutatkozó eltéréseket — például kationcserélő gyanták, kationcserélő cellulóz vagy kationcserélő dextrán-gél — vagy az eltérő molekulatömegeket — például dextrán-gél — hasznosítva érjük el. A kívánt vegyületeket a hordozóanyagról megfelelő kombinációban alkalmazott eluensekkel eluálhatjuk. Eluensként például vízoldékony szerves oldószerek hidratált oldatait — így hidratált acetont vagy hidratált alkoholokat —, savakat, bázisokat, puffereket, szerves vagy szervetlen sókat tartalmazó vizes oldatokat használhatunk, az eluens öszszetétele a hordozóanyag típusától és anyagi minőségétől függ. Bizonyos esetekben a kromatográfiás eljárással kapott antibiotikum-tartalmú nyersterméket további tisztítás céljából nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárásnak vethetjük alá. A TAN-749 kinyerésére szolgáló eljárásokat részletesebben alább ismertetjük. A szűrletben lévő antibakteriális hatású anyagokat kationcserélő gyantákon — például Amberlite IRC-50 vagy CG-50 (Rohm and Haas Co., USA) — abszorbeálhatjuk majd sókat vagy savakat tartalmazó vizes oldatokkal vagy pufferoldatokkal eluálhatjuk. Az antibiotikumodat kationcserélő dextrán-gélen — például CS-Sephadex (Pharmacia Fine Chemicals, Svédország) is adszorbeálhatjuk, majd sókat vagy savakat tartalmazó vizes vagy pufferoldatokkal eluálhatjuk. A kapott eluátumból a sókat és a színezőanyagokat előnyösen aktívszénnel (Takeda Chemical Industries Co., Ltd., Japán) kromatografálva, vagy adszorpciós gyantákkal — például Diaion HP-20 vagy SP-207 (Mitsubishi Chemical Industries Co., Ltd., Japán) vagy Amberlite XAD-II (Roam and Herth Co., USA) — távolíthatjuk el. Az eluált frakciókat liofilizálássál vagy koncentrálással porrá alakítjuk. Ha a kapott por kis tisztaságú, további tisztításra előnyösen nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárást használunk. A nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárásban hordozóanyagként például TSK-gélt (Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd., Japán) vagy YMC-gélt (Yamamura Chemical Laboratories, Japán) használunk. Mozgó fázisként például metanol, acetonitril, stb. és szervetlen sókat tartalmazó vizes vagy pufferoldatok elegyeit" használhatjuk. A TAN-749-et ásványi savval — például hidrogén-kloriddal, kénsavval vagy foszforsavval —, vagy szervetlen savval — például hangyasavval, ecetsavval vagy oxálsavval — alkotott sója formájában választjuk el. A fenti eljárás termékeként kapott TAN-749-sókat szokásos módon szabad TAN-749 antibiotikummá alakíthatjuk, és a szabad formában lévő TAN-749-et szintén hagyományos módon újra sóvá alakíthatjuk. Az 1. és 2. példa szerint előállított TAN-749A, B, C és D di(hidrogén-klorid)-sóinak fizikai és kémiai tulajdonságait az alábbiakban foglaljuk össze. (I) TAN-749A-di(hidrogén-klorid) (1) Megjelenés: színtelen, szilárd anyag (2) Fajlagos forgatóképesség: [a]p5=—11±5° (c=l,06, vízben) (3) pKiau érték: 8,0 (4) Móltömeg: 326 (M+H)+, 348 (M+Na) + (SI-MS módszer, M a szabad vegyület móltömegét jelenti) (5) összegképlet: Cl5H27N503.2HCl (6) Elemanalízis: az analízist megelőzően a mintákat foszfor-pentoxid felett 40°C-on, csökkentett nyomáson 6 órán át szárítjuk (a számításnál feltételezzük, hogy a mintában 1 mól víz van) talált: számított: C—43,6±2,0% C=43,27% H=7,4± 1,0% H=7,50% N=17,0± 1,5% N=16,82% 0= — 0=15,37% Cl=16,4±l,5% Cl=l 7,03% (7) Ultraibolya (UV) abszorpciós spektrum (vízben): 1. ábrán látható; kmax: 266±3 nm (Ej7’m=658± 100) (8) Infravörös (IR) abszorpciós spektrum (KBr-módszer): 2. ábrán látható; a fő abszorpciós huliámszámok az alábbiak: 3400, 3100, 1700, 1670, 1550, 1440, 1380, 1340, 1280, 1220, 1150, 1100, 1000, 960, 870, 680 (cm’1) (9) 13C-Magmágneses rezonancia (NMR) spektrum: az alábbi jeleket DsO-ban mérjük, 100 MHz-en; a spektrum a 3. ábrán látható; 174,7(s), 172,3 (s), 171,7(s), 139,3(d), 139,3(d), 129,6(d), 125,3(d), 69,2(d), 49,2(d), 47,8(t), 39,8(t), 39,1 (t), 38,1 (t) 35,2(t), 16,0(q) (ppm) (rövidítések: s:szingulett, d:dublett, t: Triplett, q, kvadruplett) 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
