197768. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TAN-749 antibiotikumok, és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
5 1977(30 Vizsgálat fajtája Eredmény* Poli-6-hidroxí-butirát felhalmozódás — Arginin-dihidroláz + Pigment-képződés King-féle A-tápközeg — King-féle B-tápközeg + Denitrifikálás — Lipáz (Tween 80) aktivitás — Zselatin hidrolízis + Poli-ß-hidroxi-butirdt hidrolízis — Szén-források hasznosítása** trehalóz-f szacharóz 4~ L-arabinóz + propionát*** — butirát**** — szorbit + adonit + propilénglikol — etanol —-p: pozitív; —: negativ Stainer-féle tápközeget használva [Jour nal of General Microbiology 43, 159— 271 (1966] ***: nátrium-propionát ****: nátrium-butirát A fenti eredmények alapján megállapítottuk, hogy az YK-437 törzs az I. csoportba tartozik, mivel a törzs nem mutat auxotrófiát és nem halmozza fel a poli-ß-hidroxi-butirätot int race 11 u 1 á r is szén-tartalékként. Az I. csoportba tíz faj tartozik. Mivel az YK-437 törzs íluorokrómot termel és arginin-hidroláz aktivitással rendelkezik, úgy véltük, hogy a törzs a Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas chlororaphis vagy Pseudomonas aureofaciens fajok egyikébe tartozik. Az YK-437 a Pseudomonas aeruginosától a denitrifikálás és a trehalóz és geránio! hasznosítása tekintetében, a Pseudomonas putidától a zselatin hidrolízise és a trehalóz hasznosítása szempontjából különbözik. Az YK- 437 törzs a Pseudomonas chlororaphistol a denitrifikálás, a lipáz aktivitás és a szén-íorrások hasznosítása szempontjából, míg a Pseudomonas aureofacienstől a szorbit és az adonit hasznosítása szempontjából különbözik. Az YK-437 fent ismertetett jellemzői jó egyezést mutatnak a Pseudomonas fluorescens jellemzőivel. Ennek alapján az YK-437 törzset mint Pseudomonas fluorescenst azonosítottuk, és Pseudomonas fluorescens YK- 437-nek neveztük el. A Pseudomonas fluorescens YK-437-et az Institute for Fermentation-nél (1FO, Osaka, Japán) helyeztük letétbe 1985. junius 7-én, IFO 14446 szám alatt. A fenti mikroorganizmust 1985. június 15-én a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industrynál (Japán) is letétbe helyeztük, FERM P-8312 szám alatt, majd a letétbe helyezett törzset a Budapesti Szerződésben előírt letétté alakítottuk, és az FRI-nél FERM BP-1005 szám alatt tartjuk fenn. A Pseudomonas nemzetségbe tartozó baktériumok, amelyeket a találmány szerinti eljárásban is használunk, általában igen érzékeny mutagénekre, így például mesterségesen, ultraibolya fénnyel, röntgensugárzással, kémiai vegyületekkel — például nitrozo-guanidinnel vagy etil-metán-szulfonáttal, stb. — kezelve könnyen előállíthatjuk különféle variánsait, ezért a találmány szerinti eljárás minden TAN-749 termelésre képes variáns alkalmazását magában foglalja. A TAN-749-et termelő baktériumok tenyésztésére a baktériumok által hasznosítható szénforrásként például glükózt, maltózt, laktózt, melaszokat, olajat és zsírokat — például szójaolajat, .olívaolajat, stb. — és szerves savakat — például citromsavat, borostyánkősavat, glükonsavat, stb. — használhatunk. Nitrogénforrásként különféle szerves vagy szervetlen nitrogénvegyületeket használhatunk, például szójabab-lisztet, gyapotmag-port, kukoricalekvárt, szárított élesztőt, élesztőkivonatot, húskivonatot, peptont, karbamidot, ammónium-szulfátot, ammónium-nitrátot, ammónium-klorídot, és ammónium-foszfátot. Szervetlen sókat, például nátrium-kloridot, kálium-kloridot, kalcium-karbonátot, magnézium-szulfátot, kálium-dihidrogén-foszfátot, dikálium-hidrogén-foszfátot — amelyek a baktérium-tenyészetekben általában szükségesek — szintén használhatunk, külön-külön, vagy egymással kombinálva. A táptalajhoz kívánt esetben nehézfémsókat, például vas(II)-szulfátot vagy réz-szulfátot, és vitaminokat, például B, vitamint és biotint is adhatunk. A táptalajhoz kívánt esetben habzásgátló anyagként például szilikonolajat vagy poliaí kiléngl ikol-étert, és felületaktív szereket is adhatunk. Más szerves vagy szervetlen anyagokat is alkalmazhatunk, amelyekkel a baktérium szaporodását és így a TAN-749-termelést elősegíthetjük. A tenyésztést az antibiotikumok előállítására szokásosan alkalmazott eljárásokkal végezhetjük; szilárd és folyékony tenyészeteket egyaránt alkalmazhatunk. Folyékony tenyészetek esetén nyugvó tenyészetet, rázott tenyészetet, merített tenyészetet, levegőztetett tenyészetet, stb. alkalmazhatunk, legelőnyösebb a levegőztetett, merített tenyészet. A tenyésztési hőmérséklet 10 és 30°C között változhat, az inkubálást előnyösen 17 és 24°C közötti hőmérsékleten végezzük. A tápközeg pH-értéke 4 és 8 között változhat, előnyösen közel 6 és 8 közötti pH-értéken dolgozunk. A tenyésztést közel 8—168 órán át, előnyösen közel 24—144 órán át végezzük. 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
