197768. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TAN-749 antibiotikumok, és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
197768 20 Ami a TAN-749A, B, C és D tartalmú frakciót illeti, három, azonos módon, összesen 3450 liter kiindulási tenyészetből nyert frakciót koncentrálunk. A kapott 2 liter koncentrátumot 3 liter CG-50-nel (NH4+-típus) töltött oszlopon kromatografáljuk, az oszlopot 0,2 mól/l koncentrációjú sóoldattal mossuk, majd 0,5—0,8 mól/l koncentrációjú sóoldat 40 literével eluáljuk (1 —15. frakció). A TAN-749B-t és D-t tartalmazó frakció eluálódik hamarabb (6—8. frakció), és a TAN-749A-t és C-t tartalmazó frakció jelenik meg később (10—13. frakció). A TAN-749A-t és C-t tartalmazó frakciót aktívszénnel töltött oszlopon kromatografáljuk és sómentesítjük. A kapott eluátumot koncentráljuk és liofilizáljuk. 20 g TAN-749A-t tartalmazó port kapunk, amely kis mennyiségű TAN-749C-t tartalmaz. A TAN-749B-t és D-t tartalmazó frakciót aktívszénnel töltött oszlopon kromatografáljuk és sómentesítjük. A kapott eluátumot 1 liter CM-Sephadex C-25-tel töltött oszlopon (Na+-típus) kromatografáljuk, az eluálást 0,2 mól/l koncentrációjú sóoldattal végezzük. A kapott eluátumot koncentráljuk; és a kapott koncentrátumot fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, hordozóként ODS, YMC-PAK S-30-at; mozgó fázisként 5% metanolt tartalmazó 0,02 mól/l koncentrációjú 5 1 foszforsavoldatot (pH 3,0) használunk (1—50. frakció). Két frakciót kapunk,, az egyik csak TAN-749B-Í tartalmaz (15—35. frakció), a másik TAN-749B-t és D-t tartalmaz együtt (38—48. frakció). A csak TAN-749B-Í tartalmazó frakciót CM-Sephadex töltetű oszlopon, majd aktívszénnel töltött oszlopon kromatografáljuk. 3,05 g TAN-749B-di (hidrogén-klorid)-ot kapunk, amelynek fizikai állandói azonosak a leírás első részében közöltekkel. A TAN-749B-Í és D-t tartalmazó frakciót koncentráljuk és nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással újra tisztítjuk. A kapott, csak TAN-749D-t tartalmazó frakciót koncentráljuk. A koncentrátumot 10 ml IRA-402-vel (C1—-típus) töltött oszlopon folyatjuk át és az oszlopot vízzel mossuk. Az átfolyt anyagot aktívszénnel kromatografálva sómentesítjük. 15,5 mg TAN-749-di (hidrogén-klorid)-ot kapunk, amelynek fizikai állandói azonosak a leírás első részében közöltekkel. 19 A 3 g, kevés TAN-749C-t tartalmazó TAN-749A port — amelyet a fentiek szerint állítottunk elő — CM-Sephadex CG-50, majd aktívszén töltetű oszlopon kromatografáljuk, a TAN-749C arányának növelése céljából. A kapott, magas TAN-749C tartalmú port nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, majd az eljárást megismételjük, a fent ismertetett körülmények között. 20,2 mg TAN-749C-di (hidrogén-klorid) -ot kapunk, amelynek fizikai állandói azonosak a leírás első részében közöltekkel. 10 15 20 25 30 40 45 50 60 65 3. példa Kapszula előállítása i (1 ) TAN-749A ’ j . 300 mg (2) Laktóz ' 28 mg (3) Kukoricakeményítő 58 mg (4) Hidroxi-propil-cellulóz 12 mg (5) Magnézium-sztearát 2 mg A fenti (1), (2), (3) és (4) összetevőket összekeverjük és a szokásos módon granuláljuk. A granulátumhoz hozzáadjuk az (5) komponenst. Az eiegyet 1-es számú zselatin kapszulába töltjük (a Japán Gyógyszerkönyv 10. kiadásának megfelelően). 4. példa 20 g TAN-749B-t egy liter desztillált vízben oldunk. Az oldathoz 50 g mannitot adunk, és a kapott oldatot sterilre szűrjük, majd 2 mlenként ampullákba töltjük. Az ampullák tartalmát liofilizáljuk, majd leíorrasztjuk. Az ampullás készítmény használatakor az ampullát felnyitjuk és a benne lévő anyagot 2 ml fiziológiás sóoldatban oldjuk. A kapott oldatot intramuszkulárisan vagy szubkután módon adagolhatjuk. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a TAN-749A — amely di (hidrogén-klorid)-sója formájában az alábbi tulajdonságokkal rendelkezik: (i) megjelenése: színtelen, szilárd anyag (ii) fajlagos forgatóképessége: (oc)y==—11 ±5° (c=l,06, vízben) pK;TMértéke: 8,0 móltömege: 326 (M-fH)+, 348 (M+ + Na) + (SI-MS módszer, M a szabad vegyüler móltömegét jelenti) összegképlete: CI5H27N503.2HC1 elemanalízise: az analízist megelőzően a mintákat foszfor-pentoxid felett 40°C-on, csökkentett nyomáson 6 órán át szárítjuk (a számításnál feltételezzük, hogy a mintában 1 mól víz van) számított: C =43,27% H = 7,50% N =16,82% O =15,37% 0=17,03% abszorpciós spektrumú) 35 ' iv) (v) (vi) (vii) 55 (viii) (ix) talált: C =43,6±2,0% H= 7,4 ±1,0% N =17,0± 1,5% O = — 0 = 16,4± 1,5% ultraibolya (UV) ma (vízben): , "kmax- 266±3 nm (E,=658± 100) infravörös (IR) abszorpciós spektruma (KBr-módszer) a fő abszorpciós hullámszámok: 3400,3100, 1700, 1670, 1550, 1440, 1380, 1340, 1280, 1220, 1150, 1100, 1000, 960, 870, 680 (cm“1) 13C-Magmágneses rezonancia (NMR) spektruma D20-ban mérve, 100 MHz-en 174,7(s), 172,3 (s), 171,7 (s), 139,3(d), 139.3(d), 129.6(d), 125.3(d), 69.2(d), 49.2(d), 47,8(t), 39,8(t), 39,1 (t), 38,1 (t 35,2(t), 16,0(q) (ppm) 11
