197758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplanin) előállítására
197758 14 f) Rf értékei a jelzett TLC rendszerekben a 13 következők: Eluáló rendszer (térf./térf.) Rf érték I) 75:25 acetonitrihvíz 0,32 (szilikagéLMerck 60 F254) II) 30:70 acetonitril:5%-os vizes nátriumszulfát 0,61 (szilikagéLMerck, szilanizált 60 F254) Előhívás: UV-fény 254 nm-en; 3%-os etanolos ninhidrin; 1%-os metanolos fluoreszkamin. g) Retenciós idő (te) 8,3 perc, HPLC-vel végzett elemzés során, 150X4,0 mm-es ZorbaxR ODS (5—6 pm) oszlopot használva (a Zorbax név a Dupent Co. védjegye egy oktadecilszilán szilikagél mátrixra vonatkozóan) és az eluálást 40 perc alatt, (áramlási sebesség 2 ml/perc) lineáris grádiens mellett végezve) 0—50% B oldat az A oldatban; A oldat: 9:1 25 mM NaH2P04-acetonitril elegy, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; B oldat: 3:7 25 mM NaH2P05:acetonitril elegy, 0,1N NaOH-dal pH 6,0-ra pufferolva; belső standard: 3,5-dihidroxi-toluol, ír 5,60 perei h) A következőkben mutatunk be néhány 'H NMR adatot, amelyeket D20 kicserélés és szelektív szétkapcsolási kísérletek után kapunk. Az 'H NMR spektrumot 270 MHznél DMSO-d6-ban vesszük fel, 60°C-on, 20 mg/ml minta-koncentráció mellett (belső standard TMSO delta = 0,00 ppm): (delta ppm, multiplicitás): 1,88, s; 2,85, d; kb. 3,5, dd; 3—4; 4,20, d; 4,48, d; 4,50, d; 4,62, s; 4,96, ddd; 5,18, d; 5,31, s; 5,35, d; 5,39, s; 5,68, d; 5,71, s; 6,20, d; 6,41, s; 6,51, s; 6,56, s; 6,74, d; 6,77, s; 6,80, s; 6,80, d; 6,98, d; 7,08, s; 7,15, d; 7,21, d; 7,28, d; 7,35, d; 7,50, d; 7,56, d; 7,64, d; 7,73, d; 7,86, s; 8,42, d. i) A potenciometrikus titrálási görbe három titrálási egyenes szakaszt mutat; a pH,^ értékek: 5,0 (egy egyenérték), 7,0 (egy egyenérték), és 11 (5 egyenérték) 4:1 metil celloszolv:víz elegyben, 0,01 N NaOH-dal titrálva a vizsgálandó vegyület oldatát, amely ugyanezzel az oldószer-eleggyel előállított 0,01 N HCI-t tartalmaz, feleslegben. l) Sóképzésre képes sav-funkció jelenléte. m) Sóképzésre alkalmas bázis-funkció jelenléte. n) Két cukor-maradék, közelebbről alfa-D-mannóz és N-acetil-beta-D-glukózamin jelenléte. A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módját, de önmagukban nem kitekinthetők a találmány teljes oltalmi körét korlátozó jellegűnek. 8 1. példa: Az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplanin) előállítása a deglukoteikoplanin-benzilészter-hidroklorid hidrogenolfzisével 4,9 g lényegében tiszta deglukoteikoplanin-benzilészter-hidrokloridot 500 ml 7:3 (térf./ /térf.) metanol:0,lN HC1 elegyben oldunk és az eldatot szobahőmérsékleten és környezeti nyomáson hidrogénezzük, 3,5 g 5%-os Pd/BaS04 jelenlétében. 30 perc alatt kb. 145 ml H2 abszorbeálódik. A szuszpenziót szűrjük és a katalizátort alaposan mossuk 200 ml 1:1 metanol:víz eleggyel, majd elvetjük. A szűrleteket egyesítjük, hozzáadunk 600 ml n-butanolt és a kapott oldatot kis térfogatra töményítjük be. Aceton hozzáadásakor szilárd anyag válik ki, amelyet összegyűjtünk, és aeetonnal, majd éterrel mosunk, majd vákuumban szobahőmérsékleten egy éjjelen át szárítunk. 4,0 g lényegében tiszta L 17392 antibiotikum-hidrokloridot kapunk. 2. példa: A nyers L 17392 antibiotikum tisztítása Az előbbi eljárást követve, de nyers deglukoteikoplanin-benzilésztert alkalmazva nyers L 17392 antibiotikumot kapunk, a kiindulási anyagéval lényegében azonos tisztasággal. Ha nyers L 17392 antibiotikumot kapunk, ez a következő eljárás szerint tisztítható: 5,3 g nyers L 17392 antibiotikumot (titer 60%) feloldunk 1 liter 1:2:3) térf./térf./térf./ 0,2%-os vizes ammóniumformiát:metanol:n-butanol elegyben és az oldathoz 20 g szilanizált szilikagélt (0,06—0,2 mm; Merck 60) adunk. Megfelelő keverés után az oldószereket vákuumban sztrippeléssel eltávolítjuk és a maradékot felvisszük egy kromatográfiás oszbp tetejére, amelyet úgy készítettünk elő, hogy 750 g szilanizált szilikagélt (0,06—0,2 mm, Merck) vízben szuszpendálunk. Az oszlopot 9:1 (térf./térf.) 0,6%-os vizes ammóniumformiát:acetonitril eleggyel fejlesztjük ki. Az eluátumot elvetjük, majd az eluálást lineáris grádiens mellett folytatjuk (acetonitril vízben 1:9--4:6), 200 ml/óra sebességgel, kb. 30 órán át. 25 ml-es frakciókat szedünk és ezeket HPLC-vel vizsgáljuk. A deglukoteikoplanint tartalmazó frakciókat (200—250.) összeöntjük és n-butanolt adagolunk. Keverés után az elegyet csökkentett nyomáson kis térfogatra öményítjük be, a maradékhoz etilétert aduik és a kivált szilárd anyagot szűréssel összegyűjtjük, etiléterrel mossuk és 40°C-cm vákuumban szárítjuk. 0,9 g lényegében tiszta L L'392 antibiotikumot kapunk. 3. példa: A kristályos tiszta L 17392 antibiotikum előállítása 0,9 g lényegében tiszta L 17392 antibiotikumot 100 ml 90:10 t/térf ./térf./ víz:acetönitr 1 elegyben szuszpendálunk és a szuszpenzió pH-ját szobahőmérsékleten IN sósavval l,7--e állítjuk be. A kapott oldatot 20 ml/óra sebességgel felvisszük egy szilanizált szilika-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
