197758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplanin) előállítására
197758 A találmány tárgya eljárás az új L 17392 antibiotikum és savaddíciós sói előállítására. Az L 17392 antibiotikum olyan antibiotikus hatású anyagot képvisel, amelyet úgy állíthatunk elő, hogy a glukopeptid típusú teikoplanin antibiotikumból valamennyi cukor maradékot eltávolítjuk. A teikoplanin a korábban teichomicinnek nevezett antibiotikum nemzetközi szabadneve (INN). A teichomicint úgy állítják elő, hogy az Actinoplanes teichomyceticus nov.sp. ATCC 31121 törzset asszimilálható szén- és nitrogéníorrásokat és szervetlen sókat tartalmazó táptalajban tenyésztik (lásd a 4,239,751 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást). Az említett szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint az elkülönített fermentléből, egy megfelelő, vízoldhatatlan szerves oldószerrel végzett extrakcióval és az extraháló oldószerből a szokásos módon végzett kicsapással egy antibiotikum komplex nyerhető ki, amely teichomicin Aret, A2-t és A3-at tartalmaz. A teichomicin A2-t, amely az izolált intibiotikum komplex legnagyobb mennyiségben jelenlevő komponense, ezt követően SephadexR-en végzett oszlopkromatográfia segítségével különítjük el a kapott antibiotikum keverékből. A kristályos tiszta L 17392 antibiotikum fiziokémiai jellemzői a) Oldható vízben — 9-nél magasabb pH-n — és vizes metanolban, etanolban és acetonban; gyengén oldható etanolban és dimetilformamidban. b) UV abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja: 0,1 N sósavban: lambda,TM* 279 nm (Eicm=87,l) — 0,1 N nátriumhidroxidban: larnbdamű* 279 nm (E]^=165,3) c) IR abszorpciós spektruma nujolban a következő jelentősebb abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3250 (nüNH és nüfenolos OH) 1645 (amid I.) 1610 (nüCOO-) 1595 (deltaNH3+) 1520 (amid II.) d) D20 kicserélési és szelektív szétkapcsolási kísérletek után 270 MHz-en Bruker WH-270 spektrométerrel DMSO-d6-ban 50°C-on felvettük az 'H NMR spektrumot; néhány 'H NMR adatot a következőkben mutatunk be (delta, multiplicitás): 2,85—3,30, 2 dd; 4,12, dd; 4,37, d; 4,45, d; 4,50, s; 5,00, ddd; 5,11, d; 5,35, d; 5,56, d; 5.60, d; 6,3—7,9, m; 6,55, d; 7,37, d; 7,50, d; 7.61, d; 8,26, d; 8,5—10,2, sz; Jelmagyarázat: d = dublett dd = dublett dublettje ddd = dublett dublettjének dublettje s = szingulett m = multipletí sz = széles 1 e) Elem-analízise a következő közelítő (átlagos) százalékos összetételt mutatja: szén 58,05; hidrogén 3,58; nitrogén 8,23; klór 5,85; (11%-os tömegveszteség figyelembe vételével korrigálva, termogravimetriás elemzés alapján) f) Molekulatömege 1199, amelyet az FAB-MS elemzés is igazol; g) Képlete (a rendelkezésre álló adatok alapján) a következő: C58H45C12N7018 h) Retenciós ideje (tR) 12,2 perc a következő körülmények között: az elemzést HPLC-vel végezzük, 5 cm-es Perisorb RP-8-cal (30 pro, Merck) töltött elő-oszlopot alkalmazva; ezt egy Hibar RT 250—4 (Merck) oszlop követi, amely LiChrosorb RP-8-at (10 pm, Merck) tartalmaz, töltetként; az elúciót lineáris lépcsős grádienssel végezzük (10—30% acetonitril 0,2%-os vizes ammóniumformiátban); áramlási sebesség 2 ml (perc) belső standard: teikoplanin A2 2. komponens, amelyet a 212140í sz. nagybritanniai szabadalmi bejelentés szerint állíthatunk elő, ír=22,4 perc) i) Sóképzésre képes sav-funkció jelenléte l) Sóképzésre képes bázis-funkció jelenléte m) Cukor-maradék nincs jelen. A fizikokémiai adatok alapján az L 17392 antibiotikumnak az (I) általános képlet tulajdonítható. Egy ugyanilyen szerkezeti képletü anyagot ismertet a 0098578 sz. európai szabadalmi bejelentés, amelyet A 41030 antibiotikum B faktornak neveznek. Ezt az anyagot mikrobiológiai úton állítják elő; ez az eljárás a következő lépéseket foglalja magában: a Streptomyces Virginiáé NRRL 12525 vagy a Streptomyces Virginiáé NRRL 15156 törzzsel megfelelő táptalajon végzett fermentáció, valamint a 41030 antibiotikum B faktor elkülönítése, tisztítása és komponenseire bontása. Az L 17392 antibiotikum savas és bázisos funkciót tartalmaz, amelyek savakkal, illetőiig bázisokkal sók képzésére képesek. Az 1. 17392 antibiotikum savas és/vagy bázisos sói általában az ismert eljárások szerint állít- 1 atók elő. Ezen eljárások szerint az L 17392 anti- 1 iotikumot legalább egy mólegyenértéknyi kiválasztott savval vagy bázissal reagáltatjuk. Egy kitüntetett eljárás az L 17392 antibiotikum egy bázissal képezett sójának előállítására abban áll, hogy az L 17392 antibiotikumot és a bázist kb. ekvimoláris menynyiségben vízben reagáltatjuk, előnyösen szobahőmérsékleten és a sóképzési reakciót követően a kapott oldatot liofilizáljuk. Egy kitüntetett eljárás az L 17392 antibiotikum egy savval képezett sójának előállt á s á r a abban áll, hogy az L 17392 antibioikumot és a kiválasztott savat vizes rövidszénláncú alkanolban reagáltatjuk, előnyösen szobahőmérsékleten. Ezt követően a vizet eltávolítjuk és az L 17392 antibiotikum kere-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
