197720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-aciloxi-propil-amin származékok, valamint az azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
197720 a dúsításnál, a PKG-nak a tyúkgyomor-extraktum membránjaihoz való kötődése ment végbe és a 2. lépésnél a vörösvérsejtek úgynevezett belső/külső hólyagocskáihoz (vesicula) kapcsolódott. A vörösvérsejt-membránokról tör- 5 tént leoldás és átpufferolás után a PKC-készítmény 10 mM HPES-ben, l mM DTT-ben, 0,1%-os PEG 20000-ben, pH-7,5 volt jelen és ilyen körülmények között —70°C-on több hónapig volt raktározható hatásveszteség nél- 10 kül. Az enzim aktivitását 32-es foszforral jelzett foszfátnak a PKC foszforilezhető proteinen keresztül való beépülése útján Histon H-1 - ben határoztuk meg. A teszt komponensei a 15 következők: 50 mM HEPES (pH=7,5), 1 mM DTT, 5 mM MgCl2, körülbelül 10 pM szabad 9 Ca^, 200 pg/ml Histon, 5 pg/ml foszfatidil-szerint, 1 pg/ml 1,2-diolein, 10 pM ATP, egy mindenkor alkalmas mennyiségű PKC-készítmény és adott esetben egy tesztanyag. A két PKC-aktivátor, a foszfatidil-szerin és az 1,2- -diolein távolléte esetén ugyancsak mérhető volt radioaktív foszfát csekély beépülése; ezt a viselkedést PKC-től független kinázaktivitásként magyarázhatjuk. A szabályos körülmények között mért kinázaktivítást PKC-aktivátorok jelenlétében, illetve távollétében (tesztanyag nélkül) mindenkor 100%-nak vettük és az (I) általános képletű vegyületek gátlóhatását százalékosan arra vonatkoztattuk. Az eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg. 10 1. táblázat PS/D0 közvetítette proteinkináz C-aktívitás gátlása és az OAG által okozott lemezke-aggregácic akadályozása Vegy-Konc. PS/DO közvetítette PKCOAG által okozott lemezkeszám /mól/1/ aktiv it ás gáti ás /«{/ aggregáció akadályozás/mól/1/ 1 10"4 8® 100 1 10" 5 6l 48 1 10"° 24 l.a 10"4 25 54 l.b 10" 5 22 l.c io"4 9 l.a 10-5 6l 100 l.d 3x10"6 14 l.d ló"6 18 1. e IO"5 Iá í.f 10" 5 27 é.g 10" 5 39 53 1.1 10" 5 31 l.m 10" 5 48 1 .m _£ 10 14 2 io~4 44 2 10" 5 18 2.a 10" 5 35 2.a 10"6 13 3 10“4 70 3 10" 5 22 PS = foszfatidil-szerin OAG = olaoil-acetil-glicerol DO = 1,2-diolein 6
