197312. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetrahidroizokinolin-származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
43 197312 44 eresztettük. A nyomás-görbét és a farokpulzust egy MFE kijelzőn párhuzamosan regisztráltuk. A beadás után 1, 2, 3, és 4 órával egy adott horizontális csoport mindegyik patkányánál 30 másodpercenként 4 egymást 5 követő nyomot regisztráltunk. A további horizontális csoportokat automatikusan hasonló módon vizsgáltuk. Mindegyik patkány minden egyes megfigyelési időponthoz tartozó átlagos szisztolés -10 vérnyomásét kiszámítottuk és az egyes dózis-csoportok állatainál mindegyik megfigyelési időpontban mért értékeket egy variancía-teszt egyirányú analízise alapján összehasonlítottuk a csak vivőanyaggal kezelt 15 kontroli-csoport állatainál mért értékeket. A bármely megfigyelési időpontban p £ 0,05 értéket mutató adatokat a vegyület szignifikáns antihipertenzív aktivitásaként értékeltük. A kontroli-csoporthoz képest 2,6 kPa vagy ennél nagyobb mértékű szignifikáns vérnyomás-csökkenést okozó vegyületeket továbhi vizsgálatra érdemesnek ítéltük meg. Ezekben az esetekben kiszámítottuk a szívfrekvenciát és Ounnet teszt alkalmazásával vizsgáltuk, hogy van-e szignifikáns különbség a kontroli-csoport szivfrekvencia értékeihez képest; p £ 0,05 esetén a csupán vivőanyaggal kezelt kontrollok szívfrekvencia értékeihez képest mutatkozó eltérést szignifikánsnak tekintettük. A találmány szerinti vegyületek ebben a tesztben pozitív antihipertenzív aktivitást mutatnak. Például az 1. példa A) szakasza szerint előállított vegyülettel végzett vizsgálatok az alábbi táblázatban összefoglalt eredményeket mutatták: Vegyület Vivőanyag l.A) példa Szisztolés vérnyomás (kPa ± standard hiba 1 óra 28,5 ± 1,3 19,0 i 1,0 2 óra 30,7 ± 1,3 21,4 t 1,3 4 óra 26,7 ± 2,2 20,1 ± 1,0 7. példa 25 8. példa Kipreparált patkány-aorta-csíkkal végzett teszt Négy, a Bautin és Kingman cégtől beszerzett 250-300 g-os hím Sprague-Dawley 30 patkányt a nyak eltérésével leöltjük. A mellkasi aortát gyorsan kivettük és az adventitialis (külső) kötőszövetet eltávolítottuk. Az aortát 2-3 mm széles és 30 mm hosszú spirális csíkokká vágtuk fel. A csíkokat függőié- 35 ges helyzetben egy 10 ml módosított Krebs-oldatot tartalmazó 37 °C hőmérsékletű szövet-fürdőbe helyeztük és 95% oxigént és 5% széndioxidot tartalmazó gázkeverékkel szellőztettük. 40 A csikókra 1 g kezdeti feszítést alkalmaztunk. A rendszert 1 óra hosszat hagytuk egyensúlyba jönni, miközben a csikókat hatszor mostuk. Ezután a csikókat 10~3 mólos bárium-klorid-oldattal vagy 10-7 mólos fe- 45 nilefrin-oldattal zsugorítottuk és hagytuk, hogy a reakció egy állandó szintre álljon be. A csikókat ezt követően lépcsőzetesen növekvő koncentrációjú, találmányunk szerinti vegyületekkel kezeltük és a reagálást Grass °0 Ft 03 fotoelektromos jelátalakítóval mértük és Beckman R 611 Dynographon regisztráltuk. A találmány szerinti vegyületek e vizsgálat sorén kalciumantagonistaként nagy vazorclaxáns aktivitást mutattak. 55 Az 1. példa A) szakasza szerint előállított vegyület bárium-kloriddal és fenilefrinnel kezelt csíkokon mért pECso (-log EC») értékei: pEC» (Ba++) = 6,52+0,11 60 pECso (fenilefrin) = 6,38±0,13. Az ECse-érték a vegyületnek azt a koncentrációját jelenti, amely a báriumsóval vagy fenilefrinnel kezelt kipreparált palkány-aorta-csíkon 50%-os relaxációt okoz. 55 Kaleium-antagonista hatás szöveti szelektivitása Négy 2,5-3,5 kg-os hím újzélandi fehér (Elkhorn) nyulat fül-vénába adagolt 50 mg/kg pentobarbitál-nátriummal leöltünk és gyorsan lefejeztük az állatokat. Az agyukat gyorsan eltávolítottuk és módosított Krebspuffert tartalmazó edénybe helyeztük* és 95% oxigén és 5% szén-dioxid elegyével szellőztettük a fürdőt. A baziláris artériát kioperáltuk és egy külön szellőztetett pufferoldatot tartalmazó edénybe helyeztük. Mindegyik nyúl fülének közepéből kivágtuk a központi fül-artéria egy szakaszát és egy szellőztetett pufferoldatot tartalmazó edénybe helyeztük. A baziláris és fűli artériákat gondosan megtisztítottuk és keresztmetszeti gyűrűkre vágtuk. A baziláris artéria-gyűrűk mintegy 3 mm, a fül-artéria gyűrűk 2 mm hosszúak voltak. A gyűrűket 10 ml 37 °C-os módosított Krebs-oldatot tartalmazó szövetfürdőbe tettük és 95% oxigén és 5% szén-dioxíd elegyével szellőztettük. Mind a baziláris, mind a füli artériagyűrűkre 0,5 g kezdeti feszítést alkalmaztunk. A rendszereket 1 óra hosszat hagytuk egyensúlyba jönni, miközben a gyűrűket hatszor mostuk. A gyűrűket ezután 1 g feszítőerő eléréséig kálium-kloriddal kezeltük és hagytuk, hogy a reakció egy állandó szintre álljon be. A gyűrűket a találmányunk szerinti vegyületek fokozatosan növekvő koncentrációjú oldataival kezeltük, a reagálást Statham UC-2 fotoelektromos jelátalakítóval mértük és Beckman R611 Dynographon regisztráltuk. A találmány szerinti vegyüle- Lek a fenti vizsgálat során nagy vazorelaxáns aktivitást és az agyi artéria irányában jó szelektivitást mutattak. 23
