197212. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és daganatellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására
17 197212 18 tettük fel. A D609 vegyületet és undekánsavat 1:1, ol:2, *1:3, 1 (undekánsav) arányban kevertük össze. Azok a kombinációk, amelyek gátló hatásának faktora nagyobb, mint 103, sejttoxikus hatásokkal is rendelkeztek. Alacsonyabb koncentrációkban azonban a nem-fertőzött kontroll sejtekre nem fejtettek ki felismerhető sejttoxikus hatást. A D609/undekánsav 1:1 összetételű kombináció (az ábrán jele •) vírusellenes hatása bármelyik vegyületre, illetve az egyéb kombinációkra vonatkoztatva bizonyult a legkedvezőbbnek. Ily módon a komponenseket 1:1 arányban tartalmazó kombinációját javasoljuk alkalmazásra. Az 5. ábrán az alábbiakat szemléltetjük. HTLV III specifikus nukleinsavat (replikációs intermedierként, szuperhelikális DNS) elkülönítettük, majd gél elektroforézissel és klónozott autentikus, radioaktiv-jelzett HTLV III DNS-sel végzett hidridizációval láthatóvá tettük. 3 és 5 napos kezelés után (a, illetve c vonal) a HTLV III DNS-re jelllemzö vonal teljesen letört, ugyanakkor a nem-kezeit fertőzött (K37 T-limfóma) tenyészetekben (6 és d vonalak) a HTLV III specifikus DNS látható volt (mind a szuperhelikális I-es forma, mind a relaxált cirkuláris Il-es forma). Az egy helyen hasító endonukleázzal végzett hasítást követően az I-es és Il-es formákat a lineáris III-as formákká alakítottuk át (/ és h vonalak). Az eredmények azt szemléltetik, hogy a fenti kezeléssel a HTLV III replikécióját teljesen meggátolhatjuk. (B) D609/andekánsav daganatellenes hatása Vírusellenes hatású xantát vegyületek meghatározott lánchosszúságú - előnyösen 11 vagy 12 szénatomos lánchosszúságú - monokarbonsavakkal képzett kombinációi in vitro erős daganatellenes hatással rendelkeznek. A triciklodekán-9-il-xantogenát (D609) vagy ciklododecil-xantogenát (D435) vegyületeket vagy undekánsavval vagy dodekánsavval különböző transzformált sejteknek együtt adagolva (általában alacsony szérum-követelményeket mutatnak) sejtpusztulást okozhatnak. Abban az esetben, ha ugyanakkora koncentrációban olyan egészséges sejtekbe adagoltuk a kombinációt, amelyekből a transzformáit sejtek keletkeztek, vagy semmilyen vagy csak lényegesen enyhébb hatást figyeltünk meg. A fentieket a 8. táblázatban szemléltetjük, ahol a D609/undekánsav kombináció egészséges és transzformált sejtekre kifejtett hatását hasonlítottuk össze. A daganatos ('is a kémiailag vagy vírussal transzformált) sejtek szelektív- elpusztítása egyértelműen a « túlélés-aránynak a különbségéből - a faktor 10'6 értéket., vagyis a vizsgált rendszerben a kimutathatóságot érte el - következik. Mig az egészséges sejtek gyakorlatilag változatlanok maradtak a kezelés után, transzformált származékaik (melyek alacsony szérum-követelményeket mutatnak) elpusztultak ugyanezen kezelést követően. A Meth-A-daganatot (fibroszarkóma fajta) a D609/undekánsav kombinációval végzett i itraperitoneális kezeléssel sikeresen lehetett megelőzni (6. ábra). A terápiás hatékonyságot továbbá még előrehaladott állapotban (5 nappal a fertőzés után) is ki tudtuk mutatni (7. ábra). Amennyiben a kezelést undekánsav' nélkül, csak D609 vegyülettel végeztük, lényegében daganatellenes hatást kimutatni nem tudtunk. A 8. ábrán különböző B- és T-sejt-limf óinak szelektív elpusztítását szemléltetjük [ugyanakkor a perifériás humán vér limfocitákra (pBL) a kezelés nem hat). A 8. táblázatban a xantát/monokarbonsav kezelésnek a különböző sejt-tipusok növekedési jellemzőire gyakorolt hatását mutatjuk be. A sejteket 3,8xl04/cm2 sűrűségben műanyag tartóedényekbe vagy Petri-csészékbe vittük be, majd 4 óra múlva új szővettenyészeti táptalajt [Eagle-féle alaptáptalajt 2,2 g nátrium-hidrogén-karbonáttal, 1% penicillinnel és streptomycinnel (BME-vel), valamint 9% fótális szarvasmarha szérummal (FBS-sel) egészítettünk ki] 10 pg/ml D609 vegyület és 10 pg/ml undekánsav kombinációjával együtt vagy anélkül adtunk hozzá. A kapott tenyészetet 5%-os szén-dioxid atmoszférában (pH-ja 7,4±0,05), 37 °C hőmérsékleten inkubáltuk (mind a kontrollal, mind a kezelt tenyészettel két kísérletet végeztünk. A szövettenyészeti táptalajt 24 óra múlva 10% FBS-sel kiegészített BME-vel ismét feltöltőttük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 10
