197046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás parazitaellenes hatású makrolid vegyületek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására és az ezeket tartalmazó növényvédőszerek
11 1S7046 12 hexánnal; halogénezett szénhidrogénnel, például kloroformmal, szén-tetrakloriddal vagy metilénkloriddal; alkohollal, például metanollal vagy etanollal; diollal, például propán-l,2-diolial; észterrel, például metil-acetáttal vagy etil-acetáttal. Ha a micéliumok jelentős mennyiségű vizet tartalmaznak, célszerű vízoldható oldószert használni. Az optimális kitermelés érdekében célszerű többszöri extrakciót végezni. Az első extrakciót előnyösen vízzel elegyedő oldószerrel, például metanollal vagy acetoimal végezzük. Az antiobiotikumok nyers extraktumként nyerhetők az oldószer eltávolítása után. Kívánt esetben, az oldószer térfogatának csökkentése után, az oldószeres extraktumok maguk is extrahálhatók. Ilyenkor célszerű vízzel nem elegyedő oldószert, például hexánt, kloroformot, metilén-kloridot vagy etil-acetátot vagy ezek elegyét alkalmazni, és bizonyos mennyiségű vizet adagolni ahhoz, hogy biztosítva legyen az antibiotikum vegyületek megoszlása. A vízzel nem elegyedő fázissal olyan anyaghoz jutunk, amely az S541 antibiotikumokat tartalmazza. A B faktor kívánt esetben alkalmas oldószerből, például izopropanolból kristályosítva izolálható. Az aktív komponensek és/vagy faktorok tisztítása és/vagy elválasztása (teljesen vagy más jelenlevő makrolid vegyületektől) szokásos módszerekkel történhet, például kromatográfiásan (beleértve a nagynyomásé folyadékkromatográfiát is) alkalmas hordozón, például szilikagélen, nemfunkcionális makroretikuláris adszorpciós gyantán, például térhálós polisztirol gyantán, így Amberlite XAD-2, XAD-4 vagy XAD-1180 gyantán (Rohm and Haas Ltd. gyártmány) vagy SÍ 12 gyantán (Kastell Ltd. gyártmány) vagy szerves oldószerrel szemben ellenálló térhálós dextránon, így pl. Sephadex LH20-on (Pharmacia UK Ltd. gyártmány) vagy nagynyomásé folyadékkromatográfia esetén reverzibilis fázishordozón, pl. szénhidrogénnel kapcsolt szilikagélen, például C,e-kapcsolt szilikagélen. A hordozót töltet formájában, előnyösen oszlopba töltve alkalmazzuk. Nemfunkcionális makroretikuláris gyanta, pl. XAD-1180 vagy SÍ 12 esetén szerves oldószerelegyek, például acetonitril és víz elegye használható eluálásra. Általában égy járunk el, hogy a vegyületek alkalmas oldószerrel készült oldatát visszük fel a Sephadex oszlopra, kívánt esetben az oldószer térfogatának csökkentése után. Az oszlopot adott esetben alkalmas poláros oldószerrel moshatjuk és eluálhatjuk. Sephadex és szilikagél oszlopok esetén alkoholok, pl. metanol, szénhidrogének, pl. hexán, acetonitril, halogénezett szénhidrogének, pl. kloroform vagy metilén-klorid vagy észterek, pl. etil-acetát használhatók oldószerként. Az említett oldószerek elegyét önmagukban vagy vízzel együtt is használhatjuk. A találmány szerinti vegyületek eluálását és elválasztását/tisztftását a szokásos módszerekkel ellenőrizhetjük, például kromatográfiával, így vékonyréteg-kromatográfiásan vagy nagynyomású folyadékkromatográfiával, vagy a vegyületek előbb leírt tulajdonságainak kihasználásával. Szilikagélen végzett kromatográfiával, amikor elueisként előnyösen kloroform és etil-acetát elegyét használjuk, az S541 antibiotikumok 1 és II komponensekre bonthatók, először az I komponens eluálódik. Ezután az I komponensből a B, E és F faktorok például nagynyomásé folyadékkromatográfiával kaphatók, Hasonlóképpen, az A, C és D faktorok a II komponensből izolálhatok. A B faktor másképpen égy választható el az E és F faktoroktól, hogy alkoholból, például metanolból vagy izopropanolból kristályosítjuk. Az anyalégot, amely az E és F faktorokat tartalmazza, kívánt esetben tovább tisztíthatjuk, például szilikagélen kromatografálva, és az E és F faktorok nagynyomásé folyadékkromatográfiásán izolálhatok. Ha az egyes faktorokat elválasztottuk, tovább tisztíthatjuk, például kristályosítással, pl. metanolból, izopropanolbóí vagy metanol és víz elegyéből. Az előbbi eljárások alkalmas kombinációjának megválasztásával a találmány szerinti vegyületek szilárd formában izolálhatok. Nyilvánvaló, hogy a tisztítási lépések végrehajtási sorrendje és megválasztása bármilyen módon variálható. így kísérleteink során, a B faktort kristályos szilárd formában, 90%-ot meghaladó tisztasággal állítottuk elő. Hasonlóképpen, az A, C, D, E és F faktorokat 90%-ot meghaladó tisztasággal állítottuk elő. Az egyes faktorok azonban felhasználási területüknek megfelelő tisztaságban alkalmazhatók. így például humán gyógyászatban legalább 90%-os, előnyösen 95%-osnál nagyobb tisztaság szükséges. Állatgyógyászati, kert- és mezőgazdasági felhasználás esetén alacsonyabb tisztasági fok, például 50%os vagy ennél alacsonyabb tisztaság is megfelelő. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük. A példákban a következő rövidítéseket használjuk: tie vékonyréteg-kromatográfia (Merck 5735 silica 60 lemezek, kloroform—etil-acetát 3:1 térfogatarányű eleggyel kifejlesztve, hacsak másképp nem jelöljük), CCM oszlopkromatográfia (Merck 7734 szilica 60 töltet, 200X4 cm méretű oszlop, kloroform—etil-acetát 3:1 térfogatarányé elegygyel töltve és eluálva, hacsak másképpen nem jelöljük), hplc nagynyomásé folyadékkromatográfia, PE petroléter (íp.: 60—80 °C, hacsak másképpen nem jelöljük), EA etil-acetát. Az A, B és C tápközeg összetétele a következő: A tápközeg g/1 D-glükóz 15,0 Glicerin _ 15,0 Szója-pepton 15,0 NaCl 3,0 CaC03 1,0 F>esztillált vízben 1 literre oldva, pH nátriumhidroxiddal 7,0-ra állítva az autoklávozás előtt. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
