197044. lajstromszámú szabadalom • Eljárás streptomyces és E.coli sejtekben használható kimer klónozó vektorok előállítására
9 197 044 10 transzformálhatjuk az alábbi olyan restrikciónteníes Streptomyces törzseket, amelyek makrolid antibiotikumokat termelnek: S. caelestis (M188 antibiotikum), S. platcnsis (platenomicin), S. rochci var. bolubilis (T2636 antibiotikum), S. vcnezuelae (metilmicinek), S. griseofuscus (bundlin), S. narbonensis (josamicin, narbomicin), S. fungtcidicus (NA-181 antibiotikum), S. griseoíaciens (PA1033A, B antibiotikum), S. roscocitreus (albociklin), S. griseobruneus (albociklin), S. roseochromogenes (albociklin), S. cinerochromogenes (cineromicin B), S. albus (albomicetin), S. felleus (argomicio, pikromicin), S. rochei (lankacídin, borrelidin), S. violaceoniger (lankacidin), S. griseus (borrelidin), S. maizeus (ingramicin), S. albus var. coilmyceticus (colimícin), S. mycarofaciens (acetilleukomicin, espinomiein), S. hygroscopicus (túrimicin. relomicin, maridomicín, tilozin, knrbomicin), S. griseospiralis (relomicin), S. lavendulae (alclgamicin), S. rimosus (neutramicin), S. deltae (deltamicinek), S. fungicidicus var. espinotnycelicus (espinomicinek), S furdicidicus (midekamicin), S. eurocidicus (metil-miciu), S. griseolus (griseomicin), S. pliaeochromogenes (amaromicin, shinkomicinek), S. íimbriatus (amaromicin), S. fasciculatus (amaromicin), S. erythreus (eritromicin), S. antibioticus (oleandomicin), S. olivochromogenes (oleandomicin), S. spinichromogenes var, suragaoensis (kujirnicinek), S. kitasatoensis (leukomicin), S. narbonensis var. josamyceticus (leukomicin A3, josamicin), S. albogriseolus (mikonomicín), S. bikiniensis (chalkomicin), S. cirratus (kirramicin), S. djakartensis (niddaniicin), S. eurythermus (angolamicin), S. fradiae (tilozin, iaktenocin, makróéin), S. goslrikiensis (bandamicin), S. griseoflavus (akumicin), S. halstedii (karbomicin), S. tendae (karbomicin), S. macrosporcus (karbomicin), S. thermotolerans (karbomicin), S. aibireticuli (karbomicin) és S. ambofaciens (spiramicin). A találmány szerinti vektorokat különösen előnyösen használhatjuk fel az alábbi, restrikciómentes, transzformálható Streptomyces törzsek esetén, amelyek P-laktám-típusű antibiotikumokat termelnek: S. lipmanii (A 16884, MM4550, MM 13902), S. clavuligerus (A16886B, clavulánsav), S. laciamdurans (cefamicin C), S. griseus (cefamicin A, B), S. hygroscopicus (dezacetoxi-cefalosporin C), S. wadayamensis (WS-3442-D), S. chartreusis (SF 1623), S. heteromorphus és S. panayensis (C2801X), S. cinnamonensis, S. íimbriatus, S. halstedii, S. rochei és S. virídochromogenes (cefamicin A, B), S. cattleya (tienamiciu), és S. olivaceus, S. flavovirens, S. flavus, S. fulvoviridis, S. argenteolus és S. sioyaensis (MM4550 és MM13902). Az alábbi poliéter-tipusú antibiotikumokat termelő restrikciómentes Streptomyces törzsek esetén különösen előnyösen használhatók a találmány szerinti vektorok, és a vektorokkal különösen előnyösen transzformálhatjuk ezeket: S. albus (A204, A28695A és B, salinomicin), S. hygroscopicus (A218, cmericid, DE3936), A120 A, A28695A és B, ethcromicín, diancmicin), S. griseus (grizorixin), S, conglobatus (ionomicin), S. eurocidicus var. asterocidicus (laidlomicin), S. lasali-ensis (lazalocid), >. ribosidificus (Ionomicin), S. cacaoi var. asoensi. (lizocellin), S. cinnamonensis (monenzin), S. auacfaciens (narazin), S. gallinarius (RP 30504), S. iongwoodensis (lizocellin), S. flaveolus (CP38936), S. mutabilis (S-11743A) és S. violaceoniger (nigeri án). A találmány szerinti \ tktorokkal különösen előnyösen transzformálhatjuk az alábbi, restrikciómentes Streptomyces törzseket, amelyek glikopeptid-típusü antibiotikumokat termelnek: S. orientals és S. haranomachienses (vankomidn), S. candidus (A-35512, avoparcin) és S. eburosporeus (LL-AM 372). A találmány szerinti vektorok különösen előnyösen használhatók továbbá az alábbi, restrikciómentes Streptomyces törzsek esetén: S. granuloruber, S. roseospórus, S. lividans, S. espinosus és S. nzurcus. A fentiekben megadott reprezentatív Streptomyces gazdasejteken kívül a találmány szerinti vektorokat felhasználhatjuk E. coli sejtek transzformálására is. így a találmány szerinti vektorokat széleskörűen használhatjuk fel, és különböző mikroorganizmusok sejtjeit transzformálhatjuk velük. A találmány szerinti eljárás összes kivitelezési változata előnyösen felhasználható, ennek ellenére a rekonibináns dezoxi-ribonukleinsav klónozó vektorok és transzformánsok egy része előnyös. Előnyös vektorok a pJL114, pJL121, pJL125, pJLlSO, pJL190, P-TL192, pJL195, pJL197, pJL199 és pHJL212, előnyös transzformánsok pedig a következők: Streptomyces griseofuscus/ pJL114, S. griseofuscns/pJL121, S. griseofuscus/ p,ÍL125, S. griseofuscus/pJL180, S. griseofuscus/ pJL190, S. griseofuscus/pJL192, S. griseofuscus/ pJL195, S. griseofuscus/pJL199, S. griseofuscus/ pJL197, S. griseofuscus/plUL212, E. coli K12 C6ü0Rk-Mk-/pJL114, E. coli KI 2 C6Ü0Rk-Mk-/ pJL121, E. coli K12 C600R,.-Mt-/pJL125, E. coli K12 C600Rk-Mk-/pJLÍ80, E. coli K12 C600R,,Mk-/pJL190, E. coli K12 C600Rk.-Mk-/pJL192, E coli KI 2 C600Rk-Mk-/pTL195, E. coli K12 C6üüRk-Mk-/pJH99, E. coli K12 C600Rk-Mk-/ P.TL197 és E. coli Ki2 C600Rk-Mk-/pliJL212. Az előnyös csoporton belül a p.lL19(>, pJL192, pJL195, pJL197, pJL199 és pJL212 plazmidok és az S. griseofuscus/pJL190, S. griseofuscus/pJL192 S. griseofuscus/pJL195, S. griseofuscus/pJL197, S. griseofuscus/pJL199, S. griseofuscus/pHJL2l2, E. coli K12 C600Rt-Mk-/plL9ü, E. coli K12 C600Rk-Mk-/pJL192, E. coli K12 C600Rk-Mk-/ pJL195 és E. coli K12 C600Rk-Mk-/pJL197, E. coli K12 C600Rk-Mk-/pJL199 és E. coli K12 C600Rk-Mk-/pHJL212 transzformánsok a legelőnyösebbek. A Streptomyces griseofuscus előnyös gazdasejt, mivel nem tartalmaz endogén plazmidot, és nem szintetizál antibiotikumot. Ezért a Streptomyces griseofuscus transzformánsai antibiotikum szintézist meghatározó géneket kifejező kiónok vizsgálatára használható fel. A találmány szerinti eljárással előállított vektorok E. coli és Streptomyces sejtekben funkcionális, repükációs origót tartalmaznak, és így kitágítják a használható gazdasejtek számát. A klónozott dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciák bejuttathatok üj 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
