197044. lajstromszámú szabadalom • Eljárás streptomyces és E.coli sejtekben használható kimer klónozó vektorok előállítására
31 197 044 32 Az 1. táblázat folytatása Példa Plazmid Nagyság E. coli Sircpíomyccs száma neve kb-ban marker marker 28 pJL1201 35,8 AmpR, TetR 29 pJLl 203 27,8 AmpR, TetR 31 pJL1716 22,5 CMR, TetR 32 pJL3176 22,5 CMR, TelR 33 pJL1800 12,6 Amp«, CMR 34 pJLlSOl 12,6 AmpR, CMR 35 pJL1900 25,9 Amp8 36 pJL1905 12,1 AmpR M a pJL1200 reverz orientációja M apJL120l Bglll dcléciója P az SCP2 16,6 kb nagyságú PstI fragmensének beépítése a pBR325 PstI helyére 1» az SCP2X 16,6 kb nagyságú PstI fragmensének beépítése a pBR325 PstI helyére P az SCP2 6,0 kb nagyságú Sáli fragmensének beépítése a pBR325 Sail helyére P a pJLlBOí) fordított orientációja M, NeoR a pJL1201 19,9 kb nagyságú EcoRl-HindllI fragmensének beépítése a 7,7 kb nagyságú pLR4 EcoRi-Hindlí! fragmensébe M, NeoR a pJL1205'5,4 kb nagyságú EcoRI-Sall fragmensének és a pLR4 7,5 kb nagyságú EcoRI - részleges Sail fragmensének kapcsolása 4U II. táblázat Jellemző transzformdnsok 1) Streptomyces R/pR11, ahol R griseofuscus, ambofaciens, fradiae vagy lividans, és ahol R1 egymástól függetlenül pJL123, pJL1200, pJL1201, pJL1203, pJLl 205, pJLlSOO, pJL1801, pJL1900, pJL1905 és pJL196. 2) E. coli K12 RVR1, ahol R* C600Rk—Mk—, 294, C6Ü0 vagy RV3Ü8, és ahol Rl egymástól függetlenül az előzőekben megadott jelentésű. *=az R/pR1 kifejezés azt jelenti, hogy az R Streptomyces speciest valamely R1 plazmáddal transzformáltuk., Szabadalmi igénypontok 45 1. Eljárás E. coliban és Streptomycesben működni képes rekombináns dezoxi-ribonukleinsav klónozó vektorok előállítására, azzal jellemezve, hogy 1. replikációs origót hordozó DNS-szeggQ menst, mely legalábbis az egyik végén megfelel az 5CP2 vagy SCP1 plazmid ~15 kb nagyságú Bam- HI-Pstl restrikciós fragmensének, és magában foglalja az SCP2 vagy SCP2” plazmid ~5,4 kb nagyságú restrikciós fragmensét, 2. egy több példányban 55 létező E. coli plazmid replikációs origót tartalmazó restrikciós fragmensét, 3. az adott antibiotikumra eredetileg érzékeny E. coli sejteket transzformálva cgalább egy antibiotikummal szembeni rezisztenciát átadó egy vagy több dezoxi-ribonukleinsav-szeg- 50 nenst, és 4. egy vagy több olyan dezoxi-ribonukleínsav-szegmenst, mely Streptomyces tra funkciót és/vagy legalább egy antibiotikummal szembeni rezisztenciát ad át az adott antibiotikumra eredetileg érzékeny Streptomyces sejteket transzformálva, 65 összekapcsolunk. 17
