197044. lajstromszámú szabadalom • Eljárás streptomyces és E.coli sejtekben használható kimer klónozó vektorok előállítására
33 197 044 34 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az SCP2 vagy SCP2X plazmid restrikciós fragmenseként az 5,4 kb nagyságú EcoRI-Sall fragmenst, a 6,0 kb nagyságú Sail fragmenst vagy a 19 kb nagyságú EcoRI-Hindlll fragmenst alkalmazzuk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a több példányban létező E. coli plazmid pBR322, pBR325, pBR328 plazmid. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az E. coli-ban rezisztenciát átadó egy vagy több dezoxi-ribonukleinsavszegmensként ampicillinre, kloramfenikolra vagy tetraciklinre rezisztenciát átadó szegmenseket alkalmazunk. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces-ben rezisztenciát átadó egy vagy több dezoxi-ribonukleinsav-szegmensként neomicinre vagy thiostreptonra rezisztenciát átadó szegmenseket alkalmazunk. 6. A 4. igénypont szerinti eljárás a pJL123, pJL1200, pJL1201, pJL12()3, pJL1205, pJL1716, pJL3176, pJL18üü vagy pJL1801 plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően megválasztott fragmenseket kapcsolunk össze. 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás a pJL1900 vagy pJL1905 plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően megválasztott plazmidokat kapcsolunk össze. 8. Az 1—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antibiotikummal szembeni rezisztenciát meghatározó dezoxi-ribonukleinsav-szegmensként a pLR4 plazmid 7,7 kb nagyságú EcoRI-Hindlll restrikciós fragmensét, a pLR4 plazmid 7,5 kb nagyságú EcoRI-részlegcs Sáli restrikciós fragmensét vagy a pLR2 plazmid 1,35 kb nagyságú BamHI restrikciós fragmensét alkalmazzuk. 9. Az 1—8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás pJL120, pJL121, pJL125, pJL180, pJL181, pJL190 vagy pJL195 plazmidok előállítására, azzal jellemezve, hogy a) és b) a pJL120 és a pJL121 plazmid előállítására az SCP és pBR325 plazmidok EcoRI enzimmel emésztett fragmenseit összekapcsoljuk, c) és d) a pJL180 és a pJL181 plazmidok előállítására az SCP* plazmid 6,0 kb nagyságú Sáli enzimmel kapott fragmensét hozzákapcsoljuk a püR325 Sail fragmenséhez, e) a pJL125 plazmid előállítására a pJL121 plazmid részleges Sail fragmensét önmagával kapcsoljuk, f) a pJL190 plazmid előállítására a pJL121 plazmid 19,0 kb nagyságú 5 EcoRI-Hindlll fragmensét hozzákapcsoljuk a pLR4 plazmid 7,7 kb nagyságú EcoRI-Hindlll fragmenséhez, g) a pJL195 plazmid előállítására a pJL125 plazmid 5,4 kb nagyságú EcoRI-Sall fragmensét hozzákapcsoljuk a pLR4 plazmid 7,5 kb I P nagyságú EcoRI-részleges Sáli fragmenséhez. 10. Eljárás az 1—7. igénypontok bármelyike szerint előállított, rekombináns dezoxi-ribonukleinsav klónozó vektort tartalmazó transzformált E. coli vagy Streptomyces gazdasejt előállítására, azzal jel-15 lemezve, hogy az 1—9. igénypontok bármelyike szerint előállított plazmiddal egy E. coli vagy Streptomyces sejtet transzformálunk. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Streptomyces nemzetségbe, előnyösen 20 lividans, griseofuscus, fradiae vagy ambofaciens fajhoz tartozó törzset transzformálunk. 12. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy E. coli K12 törzset transzformálunk. 13. Eljárás transzformált Streptomyces gazdasej- 25 tek meghatározására, azzal jellemezve, hogy 1) a 10. vagy 11. igénypont szerint transzformált Streptomyces sejteket a P-gén EcoRI restrikciós helyére klónozva egy nem letális dezoxi-ribonukleinsavszekvenciát tartalmazó vektorral növesztünk, és 2) 30 a transzformált Streptomyces sejteket indikátor Streptomyces törzsből készült sejtrétegen növesztjük, és szelektáljuk azokat a telepeket, amelyek M pock fenotípust mutatnak. 14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jelle- 35 mezve, hogy SCP2* plazmid eredetű P-gént alkalmazunk. 15. A 13. vagy 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces sejtként és indikátor törzsként előnyösen Streptomyces lividans, 40 griseofuscus, fradiae vagy ambofaciens törzseket alkalmazunk. 16. A 13—15. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a rekombináns dezoxi-ribonukleínsav klónozó vektorként a pJL120, 45 pJL121, pJL125, pJL190 vagy pJL195 plazmidot alkalmazzuk. 5 db rajz 18
